1. Analyse des fragments d'ADN:
* Digestion des enzymes de restriction: Pendant le clonage, vous utilisez des enzymes de restriction pour couper votre ADN d'intérêt et le vecteur (plasmide) à des séquences spécifiques. Cela génère des fragments d'ADN de différentes tailles.
* électrophorèse sur gel: Les fragments d'ADN sont ensuite séparés en fonction de leur taille en utilisant l'électrophorèse sur gel. Une matrice de gel (généralement de l'agarose) est utilisée et un courant électrique est appliqué. Des fragments plus petits se déplacent plus rapidement et plus loin à travers le gel que les fragments plus grands.
* Visualisation: Les fragments d'ADN sont visualisés à l'aide d'un colorant qui se lie à l'ADN et aux fluoresces sous la lumière UV. Cela vous permet de voir les différentes bandes d'ADN sur le gel, représentant les différentes tailles de fragments d'ADN.
2. Utilisations dans le clonage:
* Vérification du digestion de restriction: L'électrophorèse permet de garantir que les enzymes de restriction ont réussi à couper votre ADN sur les sites corrects et que le vecteur a les sites de restriction corrects pour la ligature.
* Analyser les clones: Après la ligature (rejoignant l'insert d'ADN avec le vecteur), l'électrophorèse est utilisée pour vérifier que la ligature a été réussie. Vous pouvez comparer la taille de la molécule d'ADN recombinante avec le fragment d'ADN et le vecteur d'origine.
* bibliothèques de dépistage: L'électrophorèse peut être utilisée pour analyser les inserts d'ADN dans une bibliothèque de clones, aidant à identifier les clones avec l'insert souhaité.
en résumé: L'électrophorèse ne fait pas partie du processus de clonage central lui-même, mais c'est un outil analytique essentiel pour vérifier les différentes étapes et s'assurer que l'expérience de clonage est réussie.
