Un spectrophotomètre est utilisé pour déterminer la concentration de certains composés, tels que les protéines, dans une solution. En général, une lumière brille à travers une cuvette remplie d'un échantillon. La quantité de lumière absorbée par l'échantillon est mesurée. Puisque les composés absorbent la lumière dans différentes plages spectrales, la longueur d'onde correcte doit être définie pour l'analyse. Il existe de nombreuses façons de calculer la concentration d'échantillons inconnus par spectrophotométrie, mais l'utilisation de normes de référence donne la meilleure précision. De plus, les normes indiquent également si le spectrophotomètre fonctionne mal ou d'autres problèmes avec l'analyse.

Calculer par équations linéaires

Analyser les étalons de référence au début de l'analyse. Les étalons sont des concentrations connues et sont utilisés pour calibrer l'équipement et vérifier la précision. Tous les échantillons doivent tomber dans la plage de travail des normes. Si ce n'est pas le cas, les échantillons devront être dilués ou la concentration des étalons augmentée.

Faire un diagramme de dispersion ou un graphique linéaire avec des lectures de concentration et d'absorbance standard. La concentration sera sur l'axe des y, l'absorbance sur l'axe des x. Par exemple, les normes sont 1 ppm, 2,5 ppm et 5 ppm. La capacité d'absorption donnée était de 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 et 5 ppm = 0,75.

Mettre en forme la ligne de tendance pour afficher une équation sur le graphique. L'équation montrera la formule y = mx + b. Par exemple, en utilisant les standards de l'étape 2, l'équation est y = .1224x + 0.1531. La plupart des lignes de tendance sont interceptées à zéro, mais cela dépend de la méthode analytique et de la valeur R-squared.

Analyser des échantillons inconnus et enregistrer des mesures d'absorbance.

Utiliser l'équation (y = mx + b ) pour déterminer la concentration des échantillons.

Comprendre l'équation linéaire

Soit "Y" égal à la concentration. C'est ce qui va être résolu.

Soit "X" égal à l'absorbance de l'échantillon. C'est la capacité d'absorption mesurée par le spectrophotomètre.

Autoriser "" à égaler la pente et "b" à égaler l'ordonnée à l'origine. Les deux sont donnés, cependant si la ligne de tendance a été forcée à 0, alors "b" sera 0.

Résolvez pour la concentration. En utilisant l'exemple de l'étape 3, remplacez "x" par une absorption donnée de .563. Par conséquent:

y = .1224 (.563) + 0.1531

y (concentration) = .222011

Astuce

Les unités de la concentration seront être le même que les normes. Par exemple, les unités sont des parties par million (ppm) ou des parties par milliard (ppb).

Les étalons de référence et les échantillons sont facilement contaminés.

Avertissement

Lisez toujours toutes les parties d'essai ou de méthode avant le développement.