Par Chris Deziel Mis à jour le 24 mars 2022
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La coloration d'un spécimen avant l'examen microscopique améliore principalement la visibilité, mais ses avantages s'étendent bien au-delà du contour des limites cellulaires.
Certains colorants pénètrent dans les parois cellulaires, éclairant les structures internes et permettant aux chercheurs d'observer l'activité métabolique in situ.
De plus, les taches font la distinction entre les cellules viables et non viables.
De plus, la coloration facilite le dénombrement précis de populations cellulaires spécifiques au sein d'une biomasse donnée.
Plus de 20 réactifs de coloration distincts sont disponibles, chacun étant adapté à un objectif de diagnostic ou de recherche particulier.
La coloration accentue les structures cellulaires ; la sélection du réactif dépend de l'objectif analytique.
Le choix du colorant dépend de la caractéristique spécifique que vous souhaitez visualiser. Tous les colorants ne sont pas compatibles avec les cellules vivantes, mais ceux qui le sont, notamment le brun Bismarck, le rouge de toluène, le bleu du Nil, le rouge du Nil et les fluorescents liant l'ADN, sont largement utilisés en cytologie et en histologie.
Certaines colorations ciblent les spores, d’autres mettent en évidence les lipides ou les protéines, tandis que quelques-unes changent de couleur en présence d’amidons. Par exemple, un médecin effectuant un frottis PAP appliquerait de l'éosine Y, un colorant fluorescent acide qui vire au rouge vif contre les globules rouges, le cytoplasme et les membranes cellulaires. L'éosine Y est également couramment utilisée dans l'analyse des aspirations de moelle osseuse.
Dans de nombreux cas, une seule coloration ne suffit pas. L'hématoxyline, par exemple, colore les noyaux en bleu et, lorsqu'elle est associée à l'éosine, elle produit un fond rouge ou rose contrastant qui fait ressortir nettement les noyaux. La coloration combinée hématoxyline-éosine (H&E) est un incontournable en pathologie pour examiner l'architecture tissulaire.
La procédure de coloration de Gram est une pierre angulaire de la microbiologie clinique, permettant une identification rapide des agents pathogènes bactériens. La technique utilise une série de colorants qui colorent différemment les organismes Gram-positifs et Gram-négatifs.
Tout d’abord, du violet cristallin est appliqué, colorant toutes les cellules d’un violet uniforme. Ensuite, l'iode agit comme un mordant, enfermant le colorant dans les épaisses couches de peptidoglycane des bactéries à Gram positif, généralement les Staphylococcus et les Streptococcus, de sorte que le violet reste après la décoloration. Enfin, un contre-colorant tel que SafranineO confère une teinte rouge ou rose aux cellules Gram-négatives, créant un contraste clair entre les deux groupes.
La préparation des échantillons peut impliquer un montage à sec, un montage humide, une coupe ou un étalement. Pour la plupart des protocoles de coloration, une préparation humide est préférable :placez une goutte d'eau distillée sur la lame, positionnez l'échantillon et recouvrez-le d'une lamelle. Appliquez une goutte de solution de coloration dans un coin; l'action capillaire attire le colorant à travers l'échantillon. Placer une serviette en papier sur le côté opposé de la lame aide à évacuer l’excès de liquide, assurant ainsi une répartition uniforme. Une fois la tache complètement pénétrée, la lame est prête pour l'évaluation microscopique.