1. Fractionnement cellulaire:
* Il s'agit d'une technique classique qui implique homogénéisation (Breaking Open) Cellules, suivies de centrifugation différentielle .
* homogénéisation Peut être réalisé en utilisant diverses méthodes comme le mélange, la sonication ou l'utilisation d'une presse française.
* Centrifugation différentielle sépare les composants cellulaires en fonction de leur taille et de leur densité. Les organites plus lourds (comme les noyaux) sédimentent d'abord à des vitesses plus basses, tandis que les organites plus légers (comme les ribosomes) sont des sédiments à des vitesses plus élevées.
2. Centrifugation du gradient de densité:
* Cette technique affine le fractionnement cellulaire en superposant un gradient de solutions avec une densité croissante (par exemple, saccharose) sur un échantillon de cellules homogénéisées.
* Les organites migrent vers la couche de densité qui correspond à leur propre densité, permettant une purification supplémentaire.
3. Cytométrie en flux:
* Cette technique utilise des faisceaux laser pour analyser et trier les cellules individuelles en fonction de leurs propriétés de taille, de forme et de fluorescence.
* Il peut être utilisé pour isoler des types de cellules spécifiques qui contiennent l'organelle souhaitée.
4. Immunoprécipitation:
* Cette technique utilise des anticorps pour se lier spécifiquement aux protéines cibles associées à des organites spécifiques.
* En ajoutant des billes recouvertes des anticorps, l'organelle contenant la protéine cible peut être retirée de la solution.
5. Séparation magnétique:
* Cette technique utilise des billes magnétiques recouvertes d'anticorps contre des protéines d'organelle spécifiques.
* Les perles se lient aux organites cibles, ce qui leur permet d'être extrait à l'aide d'un aimant.
6. Chromatographie d'affinité:
* Cette technique utilise une colonne remplie d'un ligand spécifique qui se lie à l'organelle cible.
* Les organites se lient au ligand, tandis que d'autres composants cellulaires passent à travers la colonne.
7. Microfluidics:
* Cette technique utilise des dispositifs microfluidiques pour manipuler et séparer les cellules et les organites en fonction de la taille, de la forme et des propriétés de surface.
Le choix de la technique dépend de l'organelle spécifique isolée et de la pureté et de la quantité souhaitées.
