Comprendre les composants:
* enzyme vide: Cela contient tout * sauf * le substrat. Son objectif est de tenir compte de toute activité de fond ou d'absorbance qui n'est pas due à la réaction enzymatique-substrat. Cela pourrait inclure:
* Auto-activité enzymatique: Certaines enzymes pourraient avoir une légère activité même en l'absence de leur substrat spécifique.
* Réactions non enzymatiques: La solution tampon elle-même ou d'autres composants du mélange réactionnel pourrait contribuer aux changements d'absorbance.
* substrat: C'est la molécule sur laquelle l'enzyme agit pour produire un produit.
* Solution combinée: Cela comprendrait à la fois l'enzyme et le substrat.
Pourquoi les solutions séparées sont cruciales:
1. Mesure précise de la réaction spécifique: L'utilisation de blancs et de substrats séparés nous permet d'isoler et de mesurer l'activité uniquement en raison de l'interaction de l'enzyme avec son substrat spécifique. Nous pouvons soustraire l'activité de fond mesurée dans le blanc de l'activité totale mesurée dans la solution combinée.
2. Élimination des interférences: Le mélange de l'enzyme et du substrat à l'avance pourrait conduire à:
* Formation de produit prématurée: L'enzyme pourrait commencer à agir sur le substrat avant le début de l'expérience, conduisant à des résultats inexacts.
* Dégradation enzymatique: L'enzyme pourrait devenir instable ou inactive si elle est pré-mélangée avec le substrat pendant une période prolongée.
3. Contrôle du début de la réaction: En ajoutant séparément l'enzyme et le substrat, nous prenons le contrôle du moment précis que la réaction commence. Ceci est essentiel pour étudier la cinétique de la réaction (à quelle vitesse il se déroule).
Exemple:
Imaginez mesurer l'activité d'une enzyme qui décompose un substrat coloré. Si vous combinez l'enzyme et le substrat, le changement de couleur peut commencer immédiatement, ce qui rend difficile la détermination de la vitesse réelle de la réaction. L'utilisation d'un blanc pour tenir compte de toute couleur initiale et mesurer le changement de couleur spécifiquement en raison de l'action de l'enzyme sur le substrat fournira des résultats plus précis.
en résumé:
L'utilisation séparément des blancs et substrats enzymatiques est crucial pour les mesures d'activité enzymatiques précises et fiables. Cette méthode garantit que nous ne mesurons que l'activité spécifique de l'enzyme sur son substrat, éliminant les interférences et permettant l'initiation de réaction contrôlée.
