Le principe du dosage de la glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PD) repose sur la réaction enzymatique catalysée par la G6PD. Le G6PD est une enzyme qui joue un rôle crucial dans la voie des pentoses phosphates, une voie métabolique responsable de la génération du NADPH, un agent réducteur.
Dans cet essai, le G6PD catalyse l’oxydation du glucose-6-phosphate (G6P) en 6-phosphogluconate (6-PG) en utilisant le NADP+ comme accepteur d’électrons. Au cours de cette réaction, le NADP+ est réduit en NADPH, qui présente une forte absorbance à 340 nm. En mesurant l’augmentation de l’absorbance à 340 nm au fil du temps, l’activité enzymatique de la G6PD peut être quantifiée.
Voici les étapes clés impliquées dans le test G6PD :
1. Préparation des échantillons : Un échantillon contenant du G6PD, tel qu'un lysat cellulaire ou un homogénat tissulaire, est préparé.
2. Mélange réactionnel : Le mélange réactionnel comprend généralement du G6P, du NADP+, une solution tampon et l'échantillon contenant du G6PD.
3. Incubation : Le mélange réactionnel est incubé à une température et un pH spécifiques, permettant à la réaction enzymatique de se produire.
4. Mesure spectrophotométrique : L'absorbance du mélange réactionnel est mesurée à 340 nm à l'aide d'un spectrophotomètre. Cette lecture d'absorbance correspond à la quantité de NADPH produite.
5. Calculs : La variation de l'absorbance à 340 nm au fil du temps est utilisée pour calculer l'activité enzymatique de la G6PD. Ce calcul prend en compte le coefficient d'extinction du NADPH et le volume du mélange réactionnel.
6. Unités d'activité enzymatique : L'activité de la G6PD est généralement exprimée en unités par litre (U/L) ou en unités internationales par litre (UI/L), où une unité d'activité enzymatique représente la quantité d'enzyme requise pour produire 1 micromole de NADPH par minute dans les conditions de test spécifiées. .
La mesure de l'activité du G6PD a une signification clinique, car des déficits en G6PD peuvent conduire à une affection connue sous le nom de déficit en G6PD, qui provoque une anémie hémolytique en cas d'exposition à certains médicaments ou substances. Des tests de G6PD sont effectués pour diagnostiquer un déficit en G6PD et surveiller l'activité enzymatique chez les personnes atteintes de la maladie.
