Les chromosomes linéaires ne se trouvent que chez certains Actinomycètes. Streptomyces est une bactérie Gram-positive avec une teneur élevée en GC. Il possède un chromosome linéaire dont la taille varie de 6 à 10 Mo et plusieurs plasmides circulaires d'une taille totale de 1 à 10 % de l'ADN chromosomique. Les streptomycètes présentent un cycle de vie complexe impliquant des phases de croissance asexuées et sexuelles et sont connus pour leur production extensive de métabolites secondaires bioactifs chimiquement divers.

Il est nécessaire de linéariser le chromosome pour que les réplicons individuels soient résolus dans le gel du champ d'impulsion. Les réplicons sont séparés par CHEF en fonction de leur taille. Il est généralement exécuté pendant une longue période, souvent de 20 à 30 heures, pour obtenir une bonne résolution.

Voici les étapes à suivre pour plier un chromosome linéaire de Streptomyces :

1. Préparez le gel d'agarose. Faire un gel d’agarose à 1 % dans un tampon TBE 0,5X.

2. Chargez l'échantillon d'ADN. Mélangez l’échantillon d’ADN avec le tampon de chargement 6X et chargez-le sur le gel d’agarose.

3. Exécutez le gel. Faites fonctionner le gel à 14°C pendant 20 à 30 heures à 2 V/cm.

4. Visualisez l'ADN. Colorer le gel avec du bromure d'éthidium et visualiser l'ADN sous la lumière UV.

5. Pliez le chromosome. Le chromosome linéaire de Streptomyces apparaîtra comme une seule grande bande sur le gel. Pour plier le chromosome, découpez la bande du gel et placez-la sur un morceau de Parafilm.

6. Pliez le Parafilm sur le chromosome plusieurs fois jusqu'à ce qu'il soit plié dans une taille compacte.

7. Conservez le chromosome. Le chromosome replié peut être conservé à -20°C ou -80°C.

Remarque : Assurez-vous de porter des gants et des lunettes de protection lorsque vous travaillez avec du bromure d'éthidium. Le bromure d'éthidium est un mutagène et cancérigène.