1. Séquençage d'ADN:
* Séquençage direct: Il s'agit de la méthode la plus courante et la plus simple. La région d'ADN d'intérêt est amplifiée en utilisant PCR (réaction en chaîne par polymérase), puis séquencé à l'aide de techniques de séquençage automatisées. La séquence est ensuite comparée à une séquence de référence (généralement une séquence de type sauvage ou normal). Toutes les différences dans les séquences indiquent une mutation.
* Séquençage de nouvelle génération (NGS): Il s'agit d'une technologie de séquençage à haut débit qui peut séquencer simultanément des millions de fragments d'ADN. Le NGS est particulièrement utile pour détecter les mutations dans de grandes régions du génome ou pour identifier les mutations dans une population de cellules.
2. Électrophorèse:
* Polymorphisme de longueur de fragment de restriction (RFLP): Cette technique utilise des enzymes de restriction, qui coupent l'ADN à des séquences spécifiques. Si une mutation modifie un site de restriction, la taille des fragments d'ADN produite sera modifiée. Cela peut être visualisé en utilisant l'électrophorèse sur gel.
* Polymorphisme conformationnel (SSCP): Cette technique utilise le fait que les molécules d'ADN simple brin avec des mutations se replient différemment. Les molécules pliées différemment migrent différemment sur un gel, permettant la détection des mutations.
3. Tests moléculaires:
* Hybridation oligonucléotide (ASO) spécifique aux allèles: Cette technique utilise de courtes sondes d'ADN complémentaires à des allèles spécifiques. Les sondes qui correspondent à l'allèle muté s'hybrideront à l'ADN, tandis que les sondes qui correspondent à l'allèle de type sauvage ne le fera pas.
* réaction en chaîne par polymérase (PCR) avec amorces spécifiques à la mutation: Les amorces de PCR sont conçues pour amplifier spécifiquement l'allèle muté. Si la mutation est présente, le produit PCR sera amplifié, bien qu'il ne soit pas amplifié si la mutation est absente.
4. Analyse phénotypique:
* Changements dans les traits observables: Certaines mutations entraînent des changements observables dans le phénotype de l'organisme, tels que les changements de couleur, de taille ou de comportement. Ces changements peuvent être utilisés pour identifier les personnes atteintes de mutations.
* tests fonctionnels: Cela implique de tester l'activité d'une protéine ou d'une enzyme codée par le gène muté. Si la protéine ou l'enzyme n'est pas fonctionnelle ou a une activité modifiée, cela peut être utilisé pour identifier la mutation.
5. Techniques de culture cellulaire:
* lignées cellulaires immortalisées: Certaines lignées cellulaires peuvent être cultivées en laboratoire et peuvent être utilisées pour étudier les mutations. Ces lignées cellulaires peuvent être utilisées pour étudier les effets des mutations sur la croissance cellulaire, la prolifération et d'autres processus cellulaires.
* Technologies d'édition de gènes: Des outils comme CRISPR-CAS9 peuvent être utilisés pour introduire des mutations spécifiques dans les lignées cellulaires, permettant l'étude des effets de la mutation.
6. Études de population:
* Fréquence de mutation: En étudiant la fréquence des mutations dans une population, les biologistes peuvent identifier des mutations associées à des maladies spécifiques ou des phénotypes.
* Génétique de la population: Les études génétiques de la population peuvent suivre l'évolution des mutations au fil du temps et leur impact sur la forme physique globale de la population.
Il est important de noter que les méthodes utilisées pour déterminer si une mutation s'est produite variera en fonction du contexte spécifique et de la question de recherche abordée. La combinaison de plusieurs approches peut souvent fournir des preuves plus robustes de la présence d'une mutation.
