1. Marqueurs de résistance aux antibiotiques:
* Principe: Cette méthode repose sur l'insertion d'un gène de résistance aux antibiotiques avec le gène souhaité dans le vecteur. Les cellules qui prennent avec succès le vecteur recombinant acquièrent également une résistance à l'antibiotique spécifique.
* Procédure: Les cellules sont cultivées sur des milieux contenant l'antibiotique. Seules les cellules qui ont repris le vecteur recombinant et expriment le gène de résistance survivront et formeront des colonies.
* Exemple: Le gène de résistance à l'ampicilline couramment utilisé (AMPR) permet aux bactéries de survivre en présence d'ampicilline.
2. Gènes journaliste:
* Principe: Les gènes rapporteurs codent pour des protéines qui produisent un signal détectable, permettant une identification facile des cellules contenant l'ADN recombinant.
* Procédure: Les gènes rapporteurs sont souvent liés au gène souhaité, donc l'expression du gène rapporteur indique une insertion réussie de l'ADN recombinant.
* Exemples:
* gène lacz: Code bêta-galactosidase, qui décompose un substrat (x-gal) pour produire une couleur bleue.
* Gene GFP: Code pour la protéine fluorescente verte, ce qui fait briller les cellules sous la lumière UV.
3. Sélection des couleurs:
* Principe: Cette méthode utilise un système génétique où la présence de l'ADN recombinant modifie la couleur des cellules.
* Procédure: Les cellules contenant l'ADN recombinant afficheront une couleur différente de celle des cellules sans elle.
* Exemple: La méthode de dépistage bleu-blanc utilise un vecteur avec le gène LACZ perturbé par le site d'insertion de l'ADN recombinant. Les cellules avec l'ADN recombinant produiront des colonies blanches, tandis que les cellules sans elle produiront des colonies bleues.
4. Complémentation:
* Principe: Cette méthode est utilisée lorsque le gène souhaité est nécessaire pour que la cellule survive ou produise un produit spécifique.
* Procédure: Les cellules dépourvues d'un gène fonctionnel sont transformées avec le vecteur recombinant contenant le gène. Seules les cellules avec le gène fonctionnel survivront ou produiront le produit souhaité.
* Exemple: Une souche de bactéries dépourvues d'une enzyme spécifique peut être transformée avec un vecteur contenant le gène codant pour l'enzyme. Seules les bactéries transformées pourront survivre et se développer.
5. Tri des cellules activées par fluorescence (FACS):
* Principe: FACS utilise le marquage de fluorescence pour identifier et trier les cellules en fonction de caractéristiques spécifiques.
* Procédure: Les cellules exprimant le gène souhaité (liées à un marqueur fluorescent) sont triées à partir du reste en fonction de leurs propriétés de fluorescence.
* Avantages: Dépistage à haut débit, séparation précise et tri efficace des cellules.
6. PROSSION PCR:
* Principe: La PCR peut être utilisée pour amplifier une séquence d'ADN spécifique, confirmant la présence de l'ADN recombinant.
* Procédure: L'ADN est extrait des cellules et amplifié à l'aide d'amorces spécifiques au gène inséré. La présence du produit amplifié indique une insertion réussie.
Le choix de la méthode de sélection dépend de l'expérience spécifique, du vecteur utilisé et du résultat souhaité.
