1. Isoler le gène de l'insuline humaine:
* Identification du gène: Les chercheurs ont d'abord dû identifier la séquence d'ADN exacte qui code pour l'insuline humaine. Cela impliquait d'étudier le génome humain et de comprendre la structure de la protéine d'insuline.
* cloner le gène: Une fois le gène identifié, ils ont utilisé des techniques comme les enzymes de restriction et les plasmides pour couper le gène de l'insuline de l'ADN humain et l'insérer dans un petit morceau circulaire d'ADN appelé plasmide. Cela a créé une molécule d'ADN recombinante.
2. Choisir un hôte bactérien approprié:
* e. coli comme cheval de bataille: La bactérie * Escherichia coli * (E. coli) a été choisie comme organisme hôte. C'est une bactérie bien étudiée, facilement manipulée et reproduisant rapidement, ce qui le rend idéal pour la production à grande échelle.
3. Insertion du gène dans les bactéries:
* Transformation: Le plasmide recombinant contenant le gène de l'insuline humaine a été introduit dans les cellules d'E. Coli. Ce processus, appelé transformation, impliquait de créer des conditions où les bactéries prendraient le plasmide.
4. Sélection pour les bactéries transgéniques:
* Résistance aux antibiotiques: Le plasmide contenait souvent un gène pour la résistance aux antibiotiques. Cela a permis aux chercheurs d'identifier facilement les bactéries qui avaient réussi à reprendre le plasmide. Ils cultiveraient les bactéries en présence de l'antibiotique, et seules les bactéries avec le plasmide survivraient.
5. Exprimant le gène de l'insuline:
* promoteurs et réglementation: Le plasmide a été conçu pour que le gène de l'insuline humaine soit exprimé (allumé) à l'intérieur de l'E. Coli. Cela impliquait, y compris une séquence promotrice - une région d'ADN qui dit à la machinerie bactérienne de commencer à lire et à transcrire le gène de l'insuline.
6. Produire et purifier l'insuline:
* Fermentation à grande échelle: Les bactéries transgéniques d'E. Coli ont été cultivées dans de grands réservoirs de fermentation, leur permettant de produire de grandes quantités d'insuline.
* purification: Après la fermentation, l'insuline produite par les bactéries devait être purifiée dans le reste des composants bactériens. Cela impliquait diverses techniques comme la chromatographie et la filtration.
Remarque importante: Il s'agit d'un aperçu simplifié. Le processus impliquait de nombreux détails techniques, itérations et défis, et de nombreux brillants scientifiques ont contribué à son succès.
