1. Isolement du gène d'intérêt:
* Source: Le gène souhaité est obtenu à partir de son organisme d'origine (par exemple, les bactéries, la plante, l'animal).
* Méthodes: Cela peut impliquer:
* Digestion des enzymes de restriction: Les enzymes spécifiques coupent l'ADN à des séquences précises.
* PCR (réaction en chaîne par polymérase): Amplifie un fragment d'ADN spécifique.
2. Préparation du vecteur:
* Choix de vecteur: Un vecteur approprié (par exemple, plasmide, virus) est sélectionné. Le vecteur doit être capable de se reproduire dans la cellule hôte.
* Digestion des enzymes de restriction: Le vecteur est coupé avec la même enzyme de restriction utilisée pour le gène d'intérêt, créant des extrémités compatibles.
* ligature: Le gène d'intérêt et le vecteur ouvert sont combinés à l'aide de l'ADN ligase, qui remonte l'ADN ensemble.
3. Transformation:
* Introduction dans la cellule hôte: L'ADN recombinant est introduit dans une cellule hôte (par exemple, les bactéries, la levure).
* Méthodes: Les méthodes courantes comprennent:
* Transformation chimique: Les cellules sont traitées avec des produits chimiques qui augmentent la perméabilité à l'ADN.
* électroporation: Une brève impulsion électrique crée des pores temporaires dans la membrane cellulaire.
4. Sélection de cellules transformées:
* Gènes marqueurs: Le vecteur porte souvent des gènes marqueurs (par exemple, la résistance aux antibiotiques) qui permettent l'identification des cellules contenant l'ADN recombinant.
* Croissance sur les médias sélectifs: Les cellules sont cultivées sur des milieux contenant l'antibiotique. Seules les cellules avec le gène marqueur survivront et se multiplieront.
5. Production du produit génique:
* Expression: Les cellules transformées sont cultivées en grande quantité et le gène d'intérêt est exprimé.
* Production de protéines: L'ADN du gène est transcrit dans l'ARNm, qui est ensuite traduit dans la protéine souhaitée.
* purification (facultatif): Si la protéine est le produit souhaité, il peut être purifié pour éliminer d'autres composants cellulaires.
points clés à retenir:
* Enzymes de restriction: Ceux-ci agissent comme des ciseaux moléculaires, coupant l'ADN à des séquences spécifiques, laissant des "extrémités collantes" qui peuvent paire de bases avec des extrémités compatibles sur d'autres fragments d'ADN.
* vecteurs: Ce sont des véhicules qui portent le gène d'intérêt dans la cellule hôte. Les plasmides sont des morceaux circulaires d'ADN qui se répliquent indépendamment dans les bactéries. Les vecteurs viraux peuvent intégrer le gène dans le génome de l'hôte.
* Gènes marqueurs: Ces gènes permettent la sélection de cellules transformées.
* Efficacité de transformation: Le processus d'introduction de l'ADN étranger dans les cellules n'est pas efficace à 100%. Toutes les cellules ne prendront pas avec succès l'ADN recombinant.
Faites-moi savoir si vous voulez plus de détails sur un aspect spécifique de ce processus!
