La culture des cellules animales est un processus complexe et délicat, nécessitant un contrôle minutieux de plusieurs paramètres pour une croissance optimale. Ceux-ci peuvent être largement classés comme suit:
1. Paramètres physiques:
* Température: La plupart des lignées cellulaires de mammifères prospèrent à 37 ° C. Ceci est crucial pour l'activité enzymatique optimale et les processus cellulaires.
* pH: Les cellules nécessitent un environnement légèrement alcalin, généralement entre 7,2 et 7,4. Ceci est maintenu à l'aide de tampons dans les médias.
* Humidité: Une humidité élevée (généralement environ 95%) est essentielle pour prévenir l'évaporation et maintenir le bon volume de médias.
* Composition de gaz: Les cellules ont besoin d'oxygène pour la respiration et le CO2 pour maintenir le pH. Ceci est généralement fourni par les cellules incubées dans un incubateur humidifié avec 5% de CO2.
* Surface: Les cellules nécessitent une surface suffisante pour l'attachement et la croissance. Ceci est réalisé grâce à diverses méthodes telles que les flacons, les plaques multi-puits ou les microcarriers.
2. Composition des médias:
* Nutriments de base: Les médias doivent contenir des nutriments essentiels comme les acides aminés, les vitamines, le glucose et les sels, pour soutenir la croissance cellulaire et le métabolisme.
* Facteurs de croissance: Certains types de cellules nécessitent des facteurs de croissance spécifiques, comme l'insuline ou le facteur de croissance épidermique (EGF), pour stimuler la prolifération.
* sérum: Le sérum est souvent ajouté aux milieux pour fournir des nutriments et des facteurs de croissance essentiels, ainsi que des protéines pour la fixation et la protection. Cependant, le sérum est un mélange complexe et non défini, qui peut introduire la variabilité et les contaminants potentiels.
* tampons: Des tampons comme le bicarbonate ou les HEPES sont utilisés pour maintenir la stabilité du pH.
* Antibiotiques: Les antibiotiques sont parfois ajoutés pour empêcher la contamination bactérienne, mais elles peuvent également affecter la croissance cellulaire et doivent être utilisées avec prudence.
* Autres additifs: Selon la lignée cellulaire et l'application, d'autres additifs peuvent être nécessaires, comme les agents chélatants ou les anti-oxydants.
3. Facteurs spécifiques à la lignée cellulaire:
* Numéro de passage: Les cellules ont une durée de vie finie et leurs caractéristiques de croissance changent avec l'augmentation du nombre de passagers.
* Fréquence de sous-culture: La fréquence de division des cellules (sous-culture) dépend de la lignée cellulaire et de son taux de croissance.
* densité de semis: Le nombre initial de cellules ensemencées dans un vaisseau de culture affecte la croissance et la morphologie cellulaire.
* Facteurs de stress: Les cellules peuvent être stressées par des facteurs tels que le surpeuplement, l'épuisement des nutriments ou les fluctuations du pH, ce qui peut avoir un impact négatif sur la croissance.
4. Technique aseptique:
* stérilité: Le maintien d'un environnement stérile est crucial pour empêcher la contamination des bactéries, des champignons ou des virus. Cela implique d'utiliser des équipements et des procédures stériles.
* Prévention de la contamination: La surveillance régulière de la contamination et l'utilisation de techniques de stérilisation appropriées sont essentielles pour une culture cellulaire réussie.
5. Équipement:
* incubateur: Un incubateur humidifié qui maintient la bonne température et la composition du gaz.
* Hotte de culture cellulaire: Un capot à débit laminaire fournit un environnement stérile pour la manipulation des cellules.
* microscopes: Les microscopes sont essentiels pour visualiser la morphologie cellulaire et évaluer la croissance.
* pipettes et conteneurs stériles: Ceux-ci sont nécessaires pour manipuler et transférer des milieux de culture cellulaire et des cellules.
En contrôlant soigneusement tous ces paramètres, vous pouvez créer un environnement optimal pour la culture des cellules animales, permettant une croissance efficace et des expériences réussies. Cependant, n'oubliez pas que chaque lignée cellulaire a des exigences et des sensibilités uniques, nécessitant une optimisation supplémentaire et des protocoles spécialisés pour une croissance optimale.
