1. Phase stationnaire:
* Nature de la phase stationnaire: Différents matériaux tels que le gel de silice, l'alumine, la cellulose ou les résines d'échange d'ions présentent des polarités et des affinités variables pour différents composés. Cela dicte que les composés interagiront plus fortement et éluent ainsi plus tard.
* Taille et porosité des particules: Des particules plus petites et une porosité plus élevée offrent une plus grande surface pour l'interaction avec l'analyte, améliorant l'efficacité de séparation.
* Activité de la phase stationnaire: L'activité du gel de silice peut être ajustée avec une teneur en eau variable, affectant la résistance de l'interaction avec les composés polaires.
2. Phase mobile:
* Nature du solvant: La polarité de la phase mobile influence sa puissance éluée. Un solvant plus polaire éluera les composés polaires plus rapidement, tandis qu'un solvant moins polaire conservera des composés polaires plus longtemps.
* Force du solvant: Des solvants plus forts interagissent plus fortement avec l'analyte et les éluent plus rapidement. Cela peut être ajusté en utilisant différents solvants ou en les mélangeant dans différents rapports (élution du gradient).
* débit: Un débit plus lent permet plus d'équilibre entre les phases stationnaires et mobiles, entraînant une meilleure séparation. Cependant, les débits excessivement lents peuvent entraîner un élargissement de la bande.
3. Exemple:
* Taille de l'échantillon: Des échantillons plus grands peuvent surcharger la colonne, conduisant à une mauvaise séparation.
* Exemple de composition: Les mélanges complexes peuvent être difficiles à séparer et certains composants peuvent interférer entre eux.
* Solubilité de l'échantillon: L'échantillon doit être soluble dans la phase mobile pour assurer une bonne élution.
4. Dimensions de la colonne:
* Longueur de la colonne: Les colonnes plus longues fournissent plus de surface pour l'interaction, améliorant la séparation.
* Diamètre de la colonne: Une colonne plus étroite augmente la résolution mais limite également la taille de l'échantillon.
5. Température:
* La température affecte la solubilité de l'analyte et la viscosité de la phase mobile. Des températures plus élevées conduisent généralement à une élution plus rapide et peuvent parfois améliorer la séparation.
6. Autres facteurs:
* Pression: L'application de la pression peut augmenter le débit, mais elle peut également affecter l'efficacité de séparation.
* Type de colonne: Différentes conceptions de colonnes, telles que des colonnes emballées ou des colonnes tubulaires ouvertes, peuvent affecter la séparation.
Dans l'ensemble, la séparation réussie dans la chromatographie sur la colonne repose sur le choix de la bonne combinaison de phases stationnaires et mobiles, d'optimisation des conditions de fonctionnement et de considérer les propriétés de l'échantillon.
