Les scientifiques et les techniciens ont souvent besoin de calculer la concentration de cellules dans une suspension. Par exemple, lorsqu'un patient prélève son sang dans un cabinet médical, le laboratoire peut utiliser certaines méthodes pour rechercher la quantité de globules blancs dans un volume donné de sang. Cela donne au médecin beaucoup d'informations sur la santé de son patient, en particulier son système immunitaire et s'il combat une infection ou une autre maladie. Des tests comme celui-ci peuvent rechercher de nombreuses autres cellules dans le sang ainsi que le liquide céphalo-rachidien et d'autres fluides corporels, tels que le nombre de spermatozoïdes dans le sperme à des fins de fertilité. Les scientifiques calculent également les concentrations cellulaires de bactéries, de levures et d'autres micro-organismes à de nombreuses fins allant de la recherche écologique aux technologies industrielles. L'une des techniques les plus courantes est également enseignée dans de nombreuses classes de biologie collégiale et utilise un appareil appelé chambre de comptage.
Diluer l'échantillon
Avant que la suspension cellulaire puisse pénétrer dans la chambre de comptage , il pourrait avoir besoin de dilution car il pourrait contenir des milliers ou des millions de cellules. Dans ce cas, les cellules ne peuvent raisonnablement pas être comptées. Pour diluer l'échantillon, utiliser une pipette stérile pour placer dix microlitres de la solution cellulaire dans un tube à essai contenant 90 microlitres d'un diluant. Le type de diluant dépendra du type de cellule. Mélangez bien. Cette solution est maintenant dix fois plus diluée que l'échantillon initial, de sorte que son facteur de dilution est de 10 -1. Étiquette-le. Répétez ceci plusieurs fois, en utilisant une pipette stérile à chaque fois, jusqu'à ce que la solution soit suffisamment diluée. Si vous l'avez dilué une seconde fois, le deuxième tube à essai était 100 fois plus dilué que la solution initiale, de sorte que le facteur de dilution était de 10 -2 et ainsi de suite. Compter les cellules Vous devrez peut-être essayer plusieurs dilutions pour déterminer le bon facteur de dilution pour la chambre de comptage. Une chambre de comptage est essentiellement une très petite boîte rectangulaire claire avec une profondeur précise et une grille précise inscrite sur le dessus. Il est également connu comme un hémocytomètre, ou parfois un hémacytomètre. Le but est que la suspension soit suffisamment diluée pour que, lorsqu'elle est vue dans la chambre de comptage, aucune cellule ne se chevauche et qu'elle soit répartie uniformément dans la grille. Pipeter la suspension diluée contenant les cellules dans le puits dans la chambre de comptage, où il va se déposer dans la chambre de la grille par capillarité. Placez la chambre de comptage sur la platine du microscope et regardez-la sous faible puissance. La grille contient des carrés faits de carrés encore plus petits. Sélectionnez environ quatre ou cinq carrés, ou autant que vous avez besoin de compter au moins 100 cellules, dans un modèle de votre choix, tels que les quatre coins et un carré central. Si les cellules sont grandes, il peut s'agir de grands carrés, mais si les cellules sont petites, vous pouvez choisir les plus petits carrés. Calculer la concentration Le volume spécifique de chaque carré de la grille peut varient selon le fabricant de la chambre de comptage, mais souvent, la profondeur de la chambre est de 0,1 millimètre, la superficie des grands carrés est de 1 millimètre carré, et la surface des plus petits carrés est de 0,04 millimètre carré. Les plus grands carrés ont alors un volume de 0,1 millimètre cube. Pour cet exemple, supposons que vous avez compté un total de 103 cellules dans cinq carrés, et que vous avez dilué l'échantillon initial jusqu'à ce que le facteur de dilution soit 10 -2. Si chaque carré de la grille a un volume de 0,1 On a compté cinq millimètres cubes, puis le volume total de la chambre comptée était de 0,5 millimètre cube, et il y avait 103 cellules. Doublé pour le faire 1 millimètre cube ferait 206 cellules. Un centimètre cube est équivalent à 1 millilitre, ce qui est une mesure utile pour les liquides. Il y a 1 000 millimètres cubes dans un centimètre cube. Par conséquent, s'il y avait eu un centimètre cube, ou un millilitre, de suspension, vous auriez compté 206 000 (206 x 1 000) cellules. Voici à quoi il ressemble sous la forme d'une équation: Volume du carré de la grille × nombre de carrés comptés = volume total de la suspension comptée Nombre de cellules ÷ volume de la suspension comptée = nombre de cellules par millimètres cubes Nombre de cellules par millimètre cube × 1000 = nombre de cellules par millilitre Calcul de la concentration non diluée Vous devrez tenir compte de toute dilution effectuée pour rendre la solution initiale dénombrable le microscope. Dans cet exemple, le facteur de dilution est 10 -2. Pour calculer la concentration initiale de la solution: Nombre de cellules par millilitre ÷ facteur de dilution = Concentration cellulaire Pour cet exemple, le nombre de cellules par millilitre est de 206 000, et diviser par 10 sup. > -2 (0,01) donne une concentration cellulaire de 20 600 000 cellules par millilitre dans l'échantillon initial.
