Méthodes pour obtenir des clones à cellule unique
1. Clonage de dilution (dilution limitée)
- Principe: Diluer la suspension cellulaire à une concentration suffisamment faible pour que les cellules individuelles soient séparées et plaquées en puits ou taches individuels.
- Procédure:
- 1. Préparation: Déterminez la concentration cellulaire approximative de votre culture à l'aide d'un hémocytomètre ou d'un compteur cellulaire.
- 2. Dilution: Calculez le facteur de dilution nécessaire pour atteindre la densité cellulaire souhaitée (par exemple, 1 cellule par puits). Diluer votre suspension cellulaire en conséquence.
- 3. Placage: Plaquer les cellules diluées dans une plaque multi-puits (puits à 96, 24 puits, etc.) ou sur une boîte de Pétri.
- 4. Incubation: Laissez les cellules se développer et former des colonies.
- 5. Sélection: Identifiez les puits ou les zones avec des colonies uniques (une cellule a donné naissance à toute la colonie).
2. Micromanipulation (sélection microscopique)
- Principe: À l'aide d'un microscope et d'un micromanipulateur pour ramasser physiquement une seule cellule et le transférer dans un nouveau milieu de croissance.
- Procédure:
- 1. Préparation: Utilisez un microscope avec un micromanipulateur.
- 2. Sélection de cellules: Identifiez une seule cellule d'intérêt au microscope.
- 3. Isolement: Utilisez soigneusement le micromanipulateur pour ramasser la cellule.
- 4. Transfert: Transférer la cellule vers un nouveau milieu de croissance (par exemple, une petite boîte de culture ou un microtube).
- 5. Incubation: Laissez la cellule se développer dans une colonie.
3. Tri basé sur la cytométrie en flux
- Principe: En utilisant un cytomètre en flux pour trier les cellules en fonction de caractéristiques spécifiques (par exemple, taille, fluorescence).
- Procédure:
- 1. Étiquetage: Si nécessaire, étiquetez les cellules avec des marqueurs fluorescents pour les différencier des autres.
- 2. Tri: Exécutez la suspension cellulaire à travers le cytomètre en flux. L'instrument analyse et sépare les cellules en fonction des paramètres spécifiés.
- 3. Collection: Collectez des cellules d'intérêt dans un nouveau milieu de croissance.
- 4. Incubation: Permettez aux cellules de se développer en colonies.
Considérations pour le clonage à cellule unique
* Type de cellule: Différents types de cellules ont des caractéristiques de croissance différentes. Certains sont plus sensibles à l'isolement que d'autres.
* Moyen de croissance: Le choix du milieu de culture est essentiel pour soutenir la croissance unique.
* Pureté des clones: Assurez-vous que les colonies sélectionnées proviennent d'une seule cellule.
* temps: Le clonage peut prendre du temps, car les cellules uniques doivent se multiplier en colonie.
* Applications:
- Développement de la lignée cellulaire: Création de lignées cellulaires pures avec des propriétés spécifiques.
- dépistage des médicaments: Tester les effets des médicaments sur les cellules individuelles.
- Recherche génétique: Étudier l'expression des gènes et les mutations au niveau unique.
Faites-moi savoir si vous souhaitez plus de détails sur l'une de ces méthodes ou si vous avez des questions sur des applications spécifiques!
