Les protéines pré-colorées sont des mélanges de protéines qui ont été liés de manière covalente à un colorant . Cela leur permet d'être visualisé directement sur un gel , éliminant le besoin de procédures de coloration séparées. Ils sont couramment utilisés comme marqueurs de poids moléculaire Dans l'électrophorèse sur gel, en particulier SDS-PAGE (Électrophorèse sur gel du dodécyl sulfate de sodium).
Voici une ventilation des aspects clés:
1. Pourquoi utiliser des protéines pré-colorées?
* commodité: Aucune coloration séparée requise, économisant du temps et des efforts.
* Suivi visuel: Vous permet de suivre la progression de votre séparation des protéines pendant l'électrophorèse.
* Détermination précise de la taille: Fournit des points de référence pour déterminer le poids moléculaire des protéines inconnues.
* Dépannage: Peut aider à identifier les problèmes potentiels dans la configuration de votre électrophorèse, comme une charge de gel incorrecte ou une course inégale.
2. Comment fonctionnent les protéines pré-colorées:
* conjugaison de colorant: Les protéines sont liées de manière covalente à un colorant, généralement un colorant fluorescent ou coloré.
* Mobilité électrophorétique: Le colorant ne modifie pas significativement la mobilité électrophorétique de la protéine, ce qui signifie qu'ils migrent en fonction de leur poids moléculaire.
* Visualisation: Le colorant permet une visualisation directe des bandes de protéines sur le gel, soit sous la lumière UV, soit avec une lumière visible.
3. Caractéristiques clés des protéines pré-colorées:
* Plage de poids moléculaire: Disponible dans diverses gammes pour répondre à différents besoins expérimentaux.
* Propriétés de colorant: Le colorant utilisé affecte la sensibilité et la visibilité des bandes.
* stabilité: Certaines protéines pré-colorées sont plus stables que d'autres et peuvent résister aux conditions difficiles.
* Compatibilité: Assurez-vous la compatibilité avec votre tampon d'électrophorèse et votre type de gel.
4. Applications des protéines pré-colorées:
* marqueurs de poids moléculaire SDS-PAGE: L'application la plus courante.
* Western blot: Utilisé comme référence de taille pour les protéines transférées.
* Surveillance de la purification des protéines: Pour suivre la migration des protéines pendant les procédures de purification.
* Dépannage électrophorèse sur gel: Aidez à diagnostiquer des problèmes comme le chargement inégal des gels.
5. Types de marqueurs de protéines pré-colorés:
* Marqueurs arc-en-ciel: Contiennent un mélange de protéines avec différentes couleurs pour une identification facile de chaque bande.
* Marqueurs à couleurs: Contiennent un seul colorant et fournissez moins de différenciation visuelle, mais peuvent être utiles pour des applications spécifiques.
6. Avantages de l'utilisation de protéines pré-colorées:
* flux de travail simplifié: Élimine des étapes de coloration séparées, économisant du temps et des efforts.
* Suivi visuel: Permet la surveillance en temps réel de la séparation des protéines pendant l'électrophorèse.
* Détermination de taille fiable: Fournit des références de poids moléculaire précises.
* Aide au dépannage: Aide à identifier les problèmes potentiels dans la configuration de l'électrophorèse.
7. Inconvénients de l'utilisation de protéines pré-colorées:
* Coût: Peut être plus cher que les normes protéiques traditionnelles.
* Sensibilité: Peut ne pas être aussi sensible que les normes protéiques traditionnelles, en particulier pour les protéines à faible abondance.
* Interférence de colorant: Le colorant peut interférer avec certaines applications en aval, comme le séquençage des protéines ou la spectrométrie de masse.
Dans l'ensemble, les protéines pré-colorées sont un outil pratique et précieux pour les chercheurs travaillant avec l'électrophorèse sur gel. Ils fournissent un moyen simple et fiable de suivre la migration des protéines et de déterminer le poids moléculaire. Cependant, il est important de choisir le marqueur approprié pour votre application spécifique et de considérer les limitations potentielles.
