1. Lyse cellulaire:
* Breaking Open Cellules: La centrifugation est utilisée pour briser les cellules ouvertes (comme les cellules sanguines, les bactéries ou les cellules végétales) pour libérer l'ADN. Cela peut être fait par des méthodes physiques comme le vortex ou la sonication, mais la centrifugation aide à séparer les débris cellulaires de l'ADN libéré.
* Retrait des débris cellulaires: Après la lyse, l'échantillon est centrifugé à une vitesse relativement basse. Les débris cellulaires plus lourds, les organites et les protéines se déposent au fond, formant un culot, tandis que l'ADN reste dans le surnageant (le liquide au-dessus du culot).
2. Précipitation d'ADN:
* séparant l'ADN de la solution: Une fois que l'ADN est précipité hors de la solution (généralement en utilisant de l'éthanol ou de l'isopropanol), la centrifugation à une vitesse plus élevée est utilisée pour plonger l'ADN. Le culot est ensuite lavé avec une solution comme l'éthanol pour éliminer les contaminants restants.
* Concentration: La centrifugation peut également être utilisée pour concentrer l'ADN en faisant tourner un grand volume de solution en un plus petit volume. Ceci est utile lorsque vous travaillez avec de petites quantités d'ADN.
3. Purification:
* Suppression des contaminants: La centrifugation est utilisée pour éliminer les contaminants comme les protéines, les lipides et l'ARN, qui sont souvent présents aux côtés de l'ADN. Différents protocoles de centrifugation avec des vitesses et des tampons spécifiques sont utilisés pour séparer sélectivement ces contaminants.
en résumé:
* perturbation des cellules et élimination des débris: La centrifugation sépare les débris cellulaires de l'ADN libéré.
* Précipitation et concentration d'ADN: La centrifugation se marie l'ADN et aide à la concentrer.
* purification: La centrifugation sépare les contaminants de l'ADN, conduisant à un échantillon d'ADN plus propre et plus concentré.
En utilisant une combinaison de ces techniques, la centrifugation joue un rôle vital dans la garantie de l'isolement et de la purification réussis de l'ADN.
