La méthode consiste à placer un disque de papier standardisé imprégné d’une concentration spécifique de l’agent antimicrobien sur la surface d’une plaque de gélose inoculée avec la souche bactérienne testée. Les plaques sont ensuite incubées pour permettre la croissance bactérienne et la diffusion de l'agent antimicrobien du disque dans la gélose.
Après incubation, les plaques sont examinées pour détecter la présence d'une zone claire d'inhibition autour du disque. La zone d'inhibition représente la zone où la croissance bactérienne a été empêchée en raison de l'activité antimicrobienne de l'agent. Le diamètre de la zone d'inhibition est mesuré et comparé à des tableaux de référence standards pour déterminer la sensibilité ou la résistance de la souche bactérienne à l'agent antimicrobien.
La méthode de diffusion sur disque permet une évaluation qualitative ou semi-quantitative de la sensibilité aux antimicrobiens. Il peut être utilisé pour tester l’efficacité de différents agents antimicrobiens contre une souche bactérienne particulière, pour comparer la sensibilité de différentes souches bactériennes au même agent antimicrobien et pour surveiller le développement de la résistance aux antimicrobiens.
Cette méthode est couramment utilisée dans les laboratoires cliniques, les milieux de recherche et les industries pharmaceutiques pour évaluer l’efficacité des agents antimicrobiens et guider une antibiothérapie appropriée dans la pratique clinique.