Généralement, les bactéries Gram-positives retiennent le colorant cristal violet en raison de la présence d'une épaisse couche de peptidoglycane dans leur paroi cellulaire. Cette couche est responsable de la charge positive, permettant à ces bactéries de retenir le complexe cristal violet-iode formé lors du processus de coloration. Par la suite, les cellules Gram-positives apparaissent violet foncé ou bleues lorsqu’elles sont observées au microscope.
D’un autre côté, les bactéries à Gram négatif possèdent une couche de peptidoglycane plus fine et une membrane externe supplémentaire. Cette différence dans la structure de la paroi cellulaire entraîne une perte du colorant cristal violet lors de l’étape de lavage à l’alcool du protocole de coloration de Gram. Par conséquent, les bactéries Gram-négatives ne retiennent pas le complexe cristal violet-iode et absorbent ensuite la contre-coloration, généralement la safranine. En conséquence, les cellules Gram-négatives apparaissent rouges ou roses lorsqu’elles sont observées au microscope.
Bien que la procédure de coloration de Gram différencie efficacement les bactéries Gram-positives et Gram-négatives, il existe quelques exceptions où la procédure peut produire des résultats inattendus. Ces exceptions comprennent :
Bactéries acido-résistantes :Certaines bactéries, comme celles appartenant au genre Mycobacterium, ont une paroi cellulaire cireuse qui empêche le colorant cristal violet de pénétrer dans les cellules. En conséquence, ces bactéries ne sont pas facilement visualisées avec la procédure de coloration de Gram et nécessitent des techniques de coloration spéciales, comme la coloration de Ziehl-Neelsen, pour être observées.
Bactéries à Gram variable :Certaines espèces bactériennes peuvent présenter des variations dans leurs caractéristiques de coloration de Gram en fonction de leurs conditions de croissance ou de leurs stades de développement. Par exemple, certaines bactéries peuvent être Gram-positives à certaines étapes de leur cycle de vie et Gram-négatives à d’autres.
Bactéries inhabituellement colorées :Dans de rares cas, certaines espèces bactériennes peuvent présenter des résultats de coloration de Gram inhabituels en raison de compositions uniques de leurs parois cellulaires ou de variations de leur composition chimique. Ces bactéries peuvent apparaître partiellement colorées ou intermédiaires dans leur réaction de coloration, ce qui rend difficile leur classification en Gram positif ou Gram négatif.
En résumé, la procédure de coloration de Gram est une technique fiable qui différencie efficacement la plupart des bactéries Gram-positives et Gram-négatives en fonction des différences dans leurs structures de paroi cellulaire. Cependant, il existe des exceptions où certaines espèces bactériennes peuvent ne pas se conformer aux modèles de coloration typiques à Gram positif ou à Gram négatif, nécessitant des méthodes de coloration alternatives ou une analyse détaillée pour une classification précise.
