NADH est produit dans le cycle de l'acide citrique, qui est une série de réactions chimiques qui convertissent le glucose en dioxyde de carbone et en eau. Au cours du cycle de l'acide citrique, le NADH se forme lorsque deux atomes d'hydrogène sont transférés d'une molécule de glucose à une molécule de NAD+ (nicotinamide adénine dinucléotide).
Les électrons portés par le NADH sont ensuite utilisés pour générer de l’ATP par phosphorylation oxydative, un processus qui se déroule dans les mitochondries. Lors de la phosphorylation oxydative, les électrons sont transférés du NADH à l'oxygène via une série de porteurs d'électrons. Lorsque les électrons se déplacent à travers les porteurs d’électrons, ils libèrent de l’énergie qui est utilisée pour pomper des ions hydrogène à travers la membrane mitochondriale. Les ions hydrogène retournent ensuite à travers la membrane via l'ATP synthase, une enzyme qui convertit l'ADP en ATP.
NADH est également impliqué dans d'autres processus cellulaires, tels que la réplication et la réparation de l'ADN, ainsi que la synthèse des lipides et des stéroïdes.