Par Tammie Painter • Mis à jour le 24 mars 2022
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La chromatographie liquide haute performance (HPLC) et la chromatographie en phase gazeuse (GC) sont des techniques analytiques fondamentales qui séparent les molécules en fonction de leur interaction avec une phase stationnaire et une phase mobile. Bien que le principe de base (les composés plus lourds ou moins polaires s'éluent plus lentement) reste identique, les deux méthodes diffèrent nettement dans leurs paramètres opérationnels, la conception de la colonne et la compatibilité des échantillons.
La HPLC utilise une phase mobile liquide, généralement un mélange de solvant organique (par exemple, acétonitrile ou méthanol), d'eau ultra pure et d'additifs qui optimisent la solubilité et la compatibilité avec l'analyte. En revanche, la GC utilise une phase mobile gazeuse ; Les vecteurs courants comprennent l'hélium, l'azote, l'argon ou l'hydrogène, choisis en fonction de la volatilité de l'analyte et des exigences du détecteur.
Les colonnes HPLC sont généralement des tubes en métal ou en verre de 4 à 6 pouces de long remplis de silice ou de phases stationnaires polymères. Les colonnes GC, quant à elles, sont des tubes capillaires enroulés dont les parois intérieures sont recouvertes de phases stationnaires adaptées à l'analyse. Ces capillaires peuvent s'étendre jusqu'à 100 pieds, offrant une haute résolution pour les composés volatils.
La GC est idéale pour les analytes volatils et thermiquement stables :petites molécules organiques, gaz et liquides à faible point d’ébullition. Les espèces non volatiles, de poids moléculaire élevé ou chargées (par exemple, les sels, les peptides) sont mieux adaptées à la HPLC, qui peut gérer des matrices aqueuses et ioniques sans avoir besoin de dérivatisation.
Les colonnes GC résident à l’intérieur d’un four ; la température est programmée avec précision pour optimiser la séparation, des températures plus élevées accélérant l'élution mais risquant la dégradation de l'analyte. Les colonnes HPLC sont généralement maintenues à température ambiante ou contrôlée, garantissant une interaction cohérente entre la phase mobile et la phase stationnaire.