Les inhibiteurs de la protéase sont des enzymes qui inhibent l'action des protéases, qui sont des enzymes qui détruisent les protéines dans les cellules. Il y a plusieurs protéases qui ciblent différentes protéines. Par conséquent, pour préserver la fonctionnalité des protéines après la lyse cellulaire, une combinaison ou un cocktail d'inhibiteurs de protéase est utilisé. Celles-ci sont disponibles sous forme de solution, de comprimé ou de poudre.

Inhibiteurs de protéase

Préparer de l'aprotinine, de la leupeptine et de la pepstatine à des concentrations de 100 μM (MicroMolar).

L'aprotinine est disponible en forme de solution à une concentration de stock de 100 mM. Pour faire 1 ml (millilitres) de 100uM, dissoudre 1ul (microlitre) dans 999ul du 1X PBS (solution de tampon physiologique).

La leupeptine est disponible sous forme de poudre. Le poids moléculaire de la leupeptine est de 475,6. Dissoudre 100 μg (microgrammes) de poudre dans 2 ml d'eau pour obtenir une concentration de 100 μM.

Pour faire de la pepstatine, dissoudre 100 μg de pepstatine en poudre dans 1,45 ml d'eau pour obtenir une concentration de 100 μM. Tous ces éléments peuvent être mélangés ensemble ou stockés individuellement à moins 80 degrés Celsius.

Faire du PMSF (fluorure de phénylméthylsulfonyle) en stock 100mM. PMSF vient sous la forme de poudre. Le poids moléculaire du PMSF est de 174,19. Dissoudre 10 mg de PMSF dans 572 ul d'éthanol à 100 pour cent et conserver à 4 degrés Celsius. Il est sensible à la lumière et doit être stocké dans l'obscurité.

Ceci est ajouté au tampon de lyse juste avant l'utilisation.

Mélanger les protéases ensemble aux concentrations requises. En général, ils sont dilués par un facteur de 100.

Astuce

Les cocktails d'inhibiteurs de protéase disponibles dans le commerce font gagner du temps et sont faciles à utiliser. Ils viennent sous la forme de comprimés ou de solutions.