Par Nitu Bansal | Mis à jour le 24 mars 2022
Le clonage TA offre une approche simple et sans restriction pour le sous-clonage des produits PCR. La technique capitalise sur l’appariement complémentaire de la thymine et de l’adénine, permettant une ligature directe sans avoir besoin d’enzymes de restriction. L'amplification PCR est généralement réalisée avec la Taq polymérase, qui ajoute un seul surplomb de 3′-adénine à chaque brin d'ADN.
Dans le clonage TA, un vecteur linéarisé, appelé vecteur T, contient des surplombs uniques en 3′-T. Le produit PCR, portant des surplombs 3′-A, est mélangé au vecteur T dans un rapport molaire élevé. L'ADN ligase T4 est ensuite ajoutée au mélange, permettant aux paires A‑T complémentaires de s'hybrider et d'être scellées, ce qui donne un plasmide recombinant.
Avantages :
Inconvénients :
Les principaux fabricants proposent des kits de clonage TA prêts à l'emploi, notamment Invitrogen, QIAGEN et Premier Biosoft. Ces kits fournissent des vecteurs T pré-préparés et des réactifs de ligature optimisés pour rationaliser le flux de travail.