Par Nitu Bansal | Mis à jour le 24 mars 2022

Le clonage TA offre une approche simple et sans restriction pour le sous-clonage des produits PCR. La technique capitalise sur l’appariement complémentaire de la thymine et de l’adénine, permettant une ligature directe sans avoir besoin d’enzymes de restriction. L'amplification PCR est généralement réalisée avec la Taq polymérase, qui ajoute un seul surplomb de 3′-adénine à chaque brin d'ADN.

Méthode

Dans le clonage TA, un vecteur linéarisé, appelé vecteur T, contient des surplombs uniques en 3′-T. Le produit PCR, portant des surplombs 3′-A, est mélangé au vecteur T dans un rapport molaire élevé. L'ADN ligase T4 est ensuite ajoutée au mélange, permettant aux paires A‑T complémentaires de s'hybrider et d'être scellées, ce qui donne un plasmide recombinant.

Avantages et inconvénients

Avantages :

• Protocole simple et rapide :aucune enzyme de restriction n'est requise.
• Idéal pour cloner des fragments dépourvus de sites de restriction appropriés.
• Haute efficacité de ligature lors de l'utilisation de vecteurs T de haute qualité.

Inconvénients :

• Les kits commerciaux peuvent être coûteux, ce qui limite leur utilisation généralisée.
• Le clonage non directionnel augmente le risque d'inversion de l'orientation de l'insert.

Kits de clonage TA

Les principaux fabricants proposent des kits de clonage TA prêts à l'emploi, notamment Invitrogen, QIAGEN et Premier Biosoft. Ces kits fournissent des vecteurs T pré-préparés et des réactifs de ligature optimisés pour rationaliser le flux de travail.