1. Confirmation de l'intégration des insert:
* Digestion et analyse des enzymes de restriction: Si la modification génétique consiste à insérer un gène spécifique, l'ADN de l'organisme modifié peut être digéré avec des enzymes de restriction qui coupent sur des sites spécifiques dans le gène inséré. Les fragments résultants peuvent ensuite être séparés par électrophorèse sur gel. La présence des tailles de fragments attendues confirme l'intégration du gène.
* Amplification et analyse PCR: Des amorces spécifiques peuvent être conçues pour amplifier la séquence de gènes insérée. La présence du produit amplifié indique l'intégration réussie du gène.
2. Vérification de l'expression:
* Isolement et analyse de l'ARN: L'ARN extrait de l'organisme modifié peut être analysé par électrophorèse sur gel pour détecter la présence d'ARNm correspondant au gène inséré. Cela confirme que le gène est en cours de transcription.
* Analyse Western blot: Cette technique peut détecter la présence du produit protéique du gène inséré.
Exemple:
Imaginez que vous avez génétiquement modifié une plante pour exprimer un gène pour la résistance aux herbicides.
* Étape 1: Vous isoleriez l'ADN des plantes modifiées et non modifiées.
* Étape 2: Vous utiliseriez les enzymes de restriction pour couper l'ADN, ciblant spécifiquement la région où le gène de résistance aux herbicides a été inséré.
* Étape 3: Vous exécuteriez l'ADN digéré sur un appareil d'électrophorèse sur gel.
* Étape 4: Vous chercheriez une bande spécifique dans le gel correspondant à la taille du gène inséré. Si la bande est présente dans la plante modifiée mais absente dans la plante non modifiée, elle confirme l'intégration réussie du gène.
Limitations:
* L'électrophorèse sur gel n'est pas toujours la technique la plus sensible. Il peut ne pas détecter de petits changements dans l'expression des gènes ou de petites quantités d'ADN inséré.
* Il peut être difficile de distinguer les différents types de mutations ou d'insertions de gènes en utilisant l'électrophorèse sur gel seule.
* Bien que l'électrophorèse sur gel puisse confirmer la présence du gène souhaité, il ne peut pas confirmer sa fonctionnalité. D'autres études fonctionnelles sont nécessaires pour confirmer que le gène est en effet exprimé et fonctionne correctement.
Autres techniques:
L'électrophorèse sur gel est souvent utilisée en conjonction avec d'autres techniques telles que le séquençage, le transfert du sud et le qPCR pour fournir une évaluation plus complète de l'expérience de modification génétique.
En conclusion, l'électrophorèse sur gel est un outil puissant pour analyser l'ADN et l'ARN et peut être utilisé pour évaluer le succès d'une expérience de modification génétique. Cependant, il est crucial d'utiliser d'autres méthodes et techniques pour confirmer les résultats et évaluer pleinement le succès de l'expérience.
