Voici pourquoi:
* Solutions alcalines ADN dénatures: Des solutions de pH élevées (alcalines) brisent les liaisons hydrogène qui maintiennent ensemble les deux brins d'ADN, conduisant à l'ADN simple brin. Bien que cela puisse sembler utile pour l'hybridation, cela dénaturait également les sondes utilisées dans le processus, ce qui les rend inefficaces.
* L'hybridation repose sur l'ADN simple brin: L'hybridation se produit entre molécules d'ADN simple brin complémentaires . Cependant, le processus de dénaturation doit être soigneusement contrôlé.
Voici comment fonctionne généralement le processus:
1. L'ADN est dénaturé: L'ADN est chauffé à une température élevée (généralement environ 95 ° C) pour briser les liaisons hydrogène et séparer les brins.
2. Hybridation: L'ADN dénaturé (ADN cible) est ensuite refroidi lentement, permettant aux brins complémentaires de sondes de se recueil (hybrider) aux séquences cibles.
3. Traitement alcalin (facultatif): * Après * l'hybridation, certains protocoles utilisent une solution alcaline légère pour éliminer les sondes non liées.
Par conséquent, le traitement alcalin n'est pas utilisé avant l'hybridation mais peut être utilisé à certaines étapes après l'hybridation pour le lavage et l'élimination des sondes non liées.
