Vmax n'est pas un seuil de concentration de substrat pour le déclenchement d'une réaction enzymatique. Vmax est la vitesse de réaction maximale qu'une enzyme peut atteindre lorsqu'elle est saturée de substrat. À ce stade, tous les sites actifs de l’enzyme sont occupés par des molécules de substrat et la réaction se déroule à la vitesse la plus rapide possible. Augmenter la concentration du substrat au-delà de ce point n'augmentera pas la vitesse de réaction, car tous les sites actifs de l'enzyme sont déjà saturés.

Le seuil de concentration du substrat pour le déclenchement d’une réaction enzymatique est connu sous le nom de constante de Michaelis, ou Km. Il s'agit de la concentration de substrat à laquelle la vitesse de réaction est la moitié de la Vmax. À ce stade, la moitié des sites actifs de l’enzyme sont occupés par des molécules de substrat et la réaction se déroule à la moitié de sa vitesse maximale possible. L'augmentation de la concentration du substrat au-dessus du Km augmentera la vitesse de réaction, mais elle n'atteindra pas le Vmax tant que tous les sites actifs de l'enzyme ne seront pas saturés.

Le Km est un paramètre important pour comprendre la cinétique des réactions enzymatiques. Il peut être utilisé pour déterminer l’affinité d’une enzyme pour son substrat, et il peut également être utilisé pour calculer la vitesse d’une réaction enzymatique à une concentration de substrat donnée.