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La détermination de la concentration de cellules dans un échantillon liquide est une tâche courante mais essentielle dans les laboratoires cliniques et de recherche. Une numération cellulaire précise informe les médecins sur l’état immunitaire d’un patient, aide à diagnostiquer les infections et guide les évaluations de la fertilité. En recherche, ils permettent aux scientifiques de quantifier les bactéries, levures et autres micro-organismes pour des études écologiques ou des procédés industriels. La méthode la plus courante et la plus fiable pour compter les cellules est l'hémocytomètre, une chambre de comptage précise largement enseignée dans les cours de biologie et utilisée dans les laboratoires professionnels du monde entier.
Lorsqu’une suspension cellulaire contient des millions de cellules, le comptage direct devient peu pratique car les cellules se chevauchent et ne peuvent être distinguées. Pour obtenir une dilution appropriée, transférez 10 µL de la solution originale dans un tube à essai stérile contenant 90 µL d'un diluant approprié (par exemple, une solution saline tamponnée au phosphate ou un milieu de culture). Bien mélanger; cela crée une dilution par dix (facteur de dilution =10⁻¹). Étiquetez le tube et répétez la procédure jusqu'à ce que l'échantillon soit suffisamment dilué pour un comptage précis. Chaque dilution supplémentaire par dix multiplie le facteur de dilution par 10 (par exemple, une deuxième dilution donne 10⁻², une troisième 10⁻³).
L'hémocytomètre est une petite chambre transparente avec une grille gravée sur sa surface inférieure. Sa profondeur est généralement de 0,1 mm et la grille est divisée en grands et petits carrés dont les superficies sont respectivement de 1 mm² et 0,04 mm². Pipeter un petit volume de suspension diluée dans le puits de la chambre. L'action capillaire répartit le liquide sur la grille. Placez la chambre sur une platine de microscope et observez-la à faible grossissement (×10–×40).
Choisissez un motif de carrés pratique (généralement les quatre coins et un carré central) pour compter au moins 100 cellules. Pour les grandes cellules, utilisez les plus grands carrés ; pour les cellules plus petites, comptez les petits carrés. Enregistrez le nombre de cellules dans chaque carré sélectionné.
Chaque grand carré a un volume de 0,1 mm³ (0,1 mm×1 mm²). Si vous comptez 103 cellules sur cinq grands carrés, le volume total compté est de 0,5 mm³. Doubler ce volume pour représenter 1 mm³ complet donne 206 cellules. Étant donné que 1 ml équivaut à 1 cm³ et contient 1 000 mm³, la concentration dans l'échantillon dilué est :
Formule :Volume de la surface comptée × nombre de carrés =volume total compté
Cellules ÷ volume total compté =cellules par mm³
cellules par mm³×1 000 =cellules par ml
Ajuster le facteur de dilution utilisé lors de la préparation. Pour un facteur de dilution de 10⁻² (c'est-à-dire 1:100), la concentration originale de l'échantillon est :
Ainsi, la suspension initiale non diluée contenait environ 20,6 millions de cellules par millilitre.
