* Enzymes de restriction: Ces enzymes agissent comme des ciseaux moléculaires, coupant l'ADN à des séquences spécifiques. Ils sont cruciaux pour créer des extrémités compatibles sur le plasmide et le gène d'intérêt.
* ligase: Cette enzyme agit comme de la colle moléculaire, rejoignant les extrémités coupées du plasmide et du gène ensemble, formant un plasmide recombinant.
Décomposons le processus:
1. Digest de restriction: Le plasmide et le gène d'intérêt sont coupés avec la même enzyme de restriction. Cela crée des extrémités collantes compatibles, qui sont des surplombs courts et défoncés qui peuvent paire de bases les uns avec les autres.
2. ligature: Le plasmide et le gène coupés sont mélangés avec une enzyme ligase. La ligase rejoint les extrémités collantes, formant un plasmide circulaire contenant le nouveau gène.
Autres enzymes importantes:
* ADN polymérase: Cette enzyme peut être utilisée pour combler les lacunes dans l'ADN, en particulier si le digestion de restriction crée des extrémités émoussées (sans surplomb collante).
* phosphatase alcaline: Cette enzyme peut être utilisée pour prévenir l'auto-ligature du plasmide, ce qui peut se produire si le plasmide est coupé avec une seule enzyme de restriction.
en résumé: La combinaison des enzymes de restriction et de la ligase est les principaux acteurs de l'insertion d'un nouveau gène dans un plasmide. D'autres enzymes peuvent être utilisées en fonction des détails spécifiques du processus de clonage.
