1. Extraction du gène d'intérêt
* Enzymes de restriction: Ces enzymes agissent comme des ciseaux moléculaires, reconnaissant des séquences d'ADN spécifiques et coupant la molécule d'ADN sur ces sites. Cela crée des fragments contenant le gène souhaité.
* vecteurs: Ce sont des molécules d'ADN qui agissent comme porteurs pour le gène d'intérêt. Les types courants comprennent les plasmides (petites molécules d'ADN circulaires trouvées dans les bactéries) et les vecteurs viraux (virus modifiés utilisés pour fournir du matériel génétique).
* enzymes ligase: Ces enzymes agissent comme de la colle moléculaire, rejoignant le gène d'intérêt dans le vecteur.
2. Recombining ADN
* dNA ligase: Comme mentionné ci-dessus, cette enzyme est cruciale pour rejoindre le gène d'intérêt dans le vecteur. Il scelle les lacunes entre les fragments d'ADN, créant une molécule d'ADN recombinante stable.
Décomposons le processus:
1. Isolement de l'ADN: L'ADN contenant le gène d'intérêt est extrait de sa source (par exemple, une plante, un animal ou une cellule bactérienne).
2. Couper l'ADN: L'ADN est traité avec des enzymes de restriction spécifiques qui coupent à des séquences précises, générant des fragments contenant le gène cible.
3. Préparation du vecteur: Le vecteur choisi (plasmide ou viral) est également coupé avec la même enzyme de restriction, créant un site compatible pour insérer le gène.
4. Rejoindre le gène et le vecteur: Le fragment de gène et le vecteur ouvert sont mélangés ensemble. L'ADN ligase rejoint les extrémités du gène et du vecteur, créant une molécule d'ADN recombinante.
5. Transformation / transfection: La molécule d'ADN recombinante est introduite dans une cellule hôte (par exemple, les bactéries). Ce processus est appelé transformation (pour les bactéries) ou transfection (pour les cellules eucaryotes).
6. Sélection et réplication: Les cellules hôtes contenant l'ADN recombinant sont sélectionnées et autorisées à se multiplier, produisant de nombreuses copies du gène d'intérêt.
Remarque importante: Ce processus est fondamental pour le génie génétique et la biotechnologie, nous permettant de créer des organismes avec de nouveaux traits ou de produire des protéines précieuses pour des applications médicales et industrielles.
