Les bactéries sont cultivées dans des boîtes de Pétri sur un milieu solide connu sous le nom de gélose bactérienne, où se forment des colonies circulaires élevées. Contrairement à une cellule bactérienne individuelle, une colonie est un groupe de bactéries suffisamment grandes pour être visibles à l'œil nu. La croissance bactérienne peut être mesurée par simple observation du nombre de colonies présentes; cependant, des méthodes plus quantitatives comprennent l'utilisation d'une chambre de comptage, ou plus souvent, des comptages de plaques viables. Ce dernier est utilisé le plus souvent car il fournit également des informations qualitatives telles que l'effet de conditions de croissance variables. Puisqu'il peut y avoir des milliards de bactéries dans une boîte de Pétri, la première mesure nécessite de diluer l'échantillon de sorte qu'il est possible de compter le nombre de colonies. Dans un tube à essai, ajouter 10 microlitres de la culture bactérienne de départ à 90 microlitres de milieu de dilution. Fermer hermétiquement le couvercle du tube et vortex doucement pour obtenir un mélange homogène. Maintenant, l'échantillon est un dixième de sa concentration d'origine.
Transférer 10 microlitres de ce nouvel échantillon dans un nouveau tube à essai contenant 90 microlitres de milieu de dilution, mélanger à nouveau. Encore une fois, le résultat sera l'échantillon encore dilué - il sera maintenant le centième de sa concentration d'origine. Répétez ceci plusieurs fois, jusqu'à ce que l'échantillon original ait été dilué entre 10 4 et 10 10 fois. Assurez-vous que chaque tube est étiqueté avec la bonne dilution, par exemple 10 -1, 10 -2 et ainsi de suite. Distribuer 10 microlitres de la dernière dilution terminée sur la plaque de gélose. En utilisant le bord d'étalement, répartir la solution bactérienne sur toute la surface de la plaque d'agar. Répétez cela pour deux autres plaques. Il est également courant d'effectuer ces étapes avec d'autres niveaux de dilution pour comparaison. Assurez-vous d'étiqueter le fond des plaques. Replacer les couvercles sur chaque plaque et laisser sécher les plaques d'agar pendant plusieurs minutes, soit sur un banc de laboratoire sous une flamme, soit dans un incubateur. Placer les plaques dans l'incubateur qui doit être réglé à la température appropriée pour la souche de bactéries. Laisser pousser de 12 à 16 heures. Les colonies devraient être visibles après 16 heures; Cependant, certaines modifications génétiques peuvent nécessiter plus de temps (par exemple, le développement de la couleur). Quand les colonies sont observables, sortez les plaques et trouvez celles qui ont entre 30 et 300 colonies. En utilisant un marqueur permanent, placez un point sur le fond de la boîte de Pétri - le côté avec l'agar, pas le couvercle - partout où une colonie est visible à travers l'agar. Comptez chaque point de marqueur. Répétez pour chaque plat. Pour mesurer la quantité de bactéries dans la culture de départ pour cette expérience, la dilution doit être inversée dans les calculs, à deux endroits. Tout d'abord, quand vous avez pris un microlitre du tube à essai pour mettre dans la boîte de Pétri, vous avez pris un dixième de l'échantillon dilué, donc vous devez multiplier tout par 10 pour inverser cela. De plus, si le facteur de dilution dans le tube à essai était, par exemple, 10 -7, alors le nombre de colonies doit être multiplié par 10 7 afin d'inverser l'effet de dilution. Supprimez simplement le signe négatif de l'exposant dans les calculs. Utilisez la formule: [Nombre de colonies comptées] × 10 × [combien de fois l'échantillon doit être multiplié pour atteindre la concentration d'origine: par exemple, 10 5] = Nombre d'unités formant des colonies (CFU) par millilitre de culture de départ. C'est la croissance bactérienne dans vos boîtes de Pétri. Assurez-vous de stériliser l'épandeur de verre en trempant le rebord dans 70 p. 100 d'éthanol. et en l'insérant dans une flamme de bec Bunsen. Laisser l'éthanol prendre feu et brûler lentement l'alcool, ce qui va tuer toute contamination bactérienne. Le toucher délicatement à la partie sèche (c'est-à-dire sans bactéries) de l'agar pour le refroidir - l'agar ne doit pas fondre au contact. Avertissement Traiter les bactéries comme si elles étaient potentiellement pathogène et utiliser les bonnes procédures de sécurité en laboratoire.
