Acide désoxyribonucléique et protéines. L'ADN est organisé en unités appelées gènes, dont chacune code pour une séquence d'ARN ou de protéine particulière. Les gènes sont étudiés pour en apprendre davantage sur la structure et la fonction biologiques, l'évolution, la maladie et de nombreux autres aspects des systèmes vivants. Pour étudier les gènes en détail, l'ADN doit être isolé et purifié à partir de cellules d'intérêt.
Bien que l'ADN d'une seule cellule puisse être extrait et étudié, il ne suffit pas de voir avec lui œil nu. Pour obtenir une quantité suffisante pour la mise en file d'attente, plus il faut travailler avec des cellules (plusieurs millions).
Les protocoles exacts varient considérablement pour tenir compte des caractéristiques uniques des échantillons spécifiques, mais les étapes générales sont l'homogénéisation. lyse, digestion, séparation et collecte. La procédure est mieux réalisée dans un petit tube de verre ou de plastique (selon la taille de l'échantillon).
Un échantillon est généralement mélangé ou broyé pour séparer complètement les cellules les unes des autres. Cela rend les ingrédients de la cellule plus accessibles aux réactifs qui suivent. Du détergent ou des enzymes sont ensuite ajoutés à l'homogénat pour lyser les membranes cellulaires (et les membranes nucléaires si les cellules sont eucaryotes) pour libérer l'ADN. À ce stade, l'ADN est entouré de protéines, de lipides, d'hydrates de carbone - tout ce qui était contenu dans les cellules.
Une autre digestion enzymatique peut être nécessaire pour décomposer les protéines afin qu'elles ne se lient pas à l'ADN. et interférer avec sa collection. L'ADN est séparé du reste du contenu de la cellule en ajoutant de l'alcool froid, pur, éthylique ou isopropylique. L'ADN n'est pas soluble dans ces alcools donc il va se condenser pour essayer de minimiser son contact avec l'alcool. Les ADN condensés sont ensuite recueillis, généralement par centrifugation - ou spoulage.
Spouling d'ADN
La collecte d'ADN par spoulage est efficace lorsqu'une grande quantité d'ADN est obtenue à partir d'une procédure d'extraction. C'est aussi une excellente méthode de démonstration car un enchevêtrement impressionnant d'ADN pur est clairement visible.
Pour spouler l'ADN, l'étape de séparation doit être effectuée avec soin. S'il ne faisait pas partie du mélange de réactifs de lyse précédemment ajouté, une solution de sel concentrée (chlorure de sodium) doit être ajoutée à la solution avant l'étape d'addition d'alcool. L'alcool froid est lentement versé sur le côté du tube à essai pour former une couche sur le dessus de la solution aqueuse, en évitant le mélange. Si c'est fait correctement, l'alcool formera sa propre couche au-dessus de la couche salée. Puis vient le bobinage.
Pour collecter l'ADN de la couche salée, placez délicatement une tige d'agitation en verre à travers la couche d'alcool jusqu'à ce qu'elle touche le fond du tube. Lentement faire tourner la tige entre les doigts, tout en regardant l'interface entre les deux couches. Si suffisamment d'ADN est présent, il s'agglomérera à l'interface entre les couches pour former une masse translucide laiteuse. Faites tourner la tige pour envelopper l'ADN autour (c'est la partie de bobinage) et sortez-le du tube. L'ADN peut être transféré dans un autre tube d'alcool pur pour stockage ou analyse ultérieure.
