L'électrophorèse sur gel est l'une des principales méthodes utilisées en biologie moléculaire pour l'analyse de l'ADN. Cette méthode implique la migration de fragments d'ADN à travers un gel, où ils sont séparés sur la base de la taille ou la forme. Cependant, même une méthode scientifiquement éprouvée comme l'électrophorèse sur gel n'est pas à l'abri des erreurs.
Comment fonctionne l'électrophorèse
L'électrophorèse sur gel implique l'utilisation d'un gel généralement constitué de polymères tels que l'agarose. Le gel est immergé dans une solution tampon qui conduit un champ électrique. L'échantillon d'ADN d'intérêt est d'abord fragmenté en utilisant des enzymes de restriction et est ensuite injecté dans le gel. Lorsque le champ électrique est activé, les fragments d'ADN dans le gel migrent vers l'électrode positive. Si les fragments d'ADN sont de tailles différentes, les temps de migration seront différents pour chaque fragment de taille. Les fragments sont ensuite visualisés à l'aide d'un colorant ou d'une autoradiographie et sont visibles sous forme de bandes dans le gel.
Contamination de l'échantillon
L'application principale de l'électrophorèse est un outil d'analyse de l'ADN dans le gel. biologie moléculaire, mais il est également utilisé en médecine légale comme un moyen d'identifier des échantillons sur une scène de crime. Il est important que les sources d'erreurs dans cette technique soient minimisées afin d'obtenir des résultats précis. Une source d'erreur est la contamination de l'échantillon d'ADN. S'il y a un ADN étranger dans l'échantillon, le gel aura plus de bandes que ne le ferait un gel qui contient seulement l'échantillon purifié.
Problèmes avec le gel, le courant et le tampon
la concentration du gel doit également être correcte pour éviter les erreurs. Si la concentration est trop élevée ou trop faible, les fragments migreront trop lentement ou trop rapidement. Cela conduira à des erreurs dans la résolution des différentes bandes. Pendant l'électrophorèse, il faut veiller à ce que la tension soit stable. Toute fluctuation de la tension entraînera une migration instable des fragments d'ADN, conduisant à des erreurs dans la lecture des bandes. La solution tampon doit également avoir la composition correcte, car un tampon dont le pH ou la concentration ionique est erroné changera la forme des fragments d'ADN, modifiant également leur temps de migration.
Visualisation correcte
Plus important encore, le gel doit être visualisé correctement. Si la concentration du colorant ou de la sonde radioactive utilisée pour visualiser les échantillons est trop élevée, l'image résultante sera très désordonnée, car les fragments résiduels seront également visualisés. Si la concentration de gel est trop faible, il n'y aura pas de visualisation. Quand les processus corrects ont été suivis pendant toutes les étapes, l'électrophorèse sur gel donnera des résultats qui sont précis et peuvent être utilisés avec une grande confiance. Comme avec toutes les procédures scientifiques, l'électrophorèse sur gel peut être sujette à des erreurs, mais celles-ci peuvent être minimisées avec une préparation et une manipulation appropriées.
