1. Choisissez la bonne technique de chromatographie:
* Chromatographie en couche mince (TLC): Il s'agit d'une technique simple et polyvalente. Il sépare les composants en fonction de leur affinité pour la phase stationnaire (généralement une plaque de gel de silice) et de la phase mobile (un solvant). Bien que vous ne verrez pas de couleurs, vous pouvez visualiser les composants séparés en utilisant:
* Lumière UV: De nombreuses substances absorbent la lumière UV, ce qui les rend visibles sous une lampe UV.
* Réactifs de visualisation: Les réactifs chimiques spécifiques peuvent réagir avec les composés séparés pour produire des taches colorées.
* vapeur d'iode: La vapeur d'iode peut réagir avec de nombreux composés organiques pour former des taches brunes.
* Chromatographie en phase gazeuse (GC): Cette technique sépare les substances volatiles en fonction de leurs points d'ébullition. Il est généralement associé à un détecteur qui peut identifier et quantifier les composants, tels que A:
* Détecteur d'ionisation de la flamme (FID): Ceci est sensible aux composés organiques.
* Spectromètre de masse (MS): Cela fournit des informations structurelles détaillées sur les composés séparés.
* Chromatographie liquide haute performance (HPLC): Cette technique puissante sépare les composants en fonction de leur polarité et de leurs interactions avec la phase stationnaire. Il est souvent utilisé pour analyser des mélanges complexes et est généralement associé à un détecteur comme:
* détecteur UV / vis: Détecte des composés qui absorbent les UV ou la lumière visible.
* Détecteur d'index de réfraction: Détecte les changements dans l'indice de réfraction du solvant d'élution causé par la présence d'un composé.
2. Visualisation et identification:
* Lumière UV: De nombreux composés, même incolores, absorbent la lumière UV. À l'aide d'une lampe UV, vous pouvez voir les taches des composés séparés sur une plaque TLC.
* Réactifs de visualisation: Différents réactifs réagissent avec des groupes fonctionnels spécifiques dans les composés pour créer des taches colorées sur une plaque TLC.
* Détecteurs: GC et HPLC utilisent des détecteurs pour signaler la présence de composants lorsqu'ils s'éteignent de la colonne.
3. Analyse quantitative:
* Normes d'étalonnage: En exécutant des quantités connues de votre substance avec votre échantillon, vous pouvez utiliser les résultats de la chromatographie pour déterminer la concentration de la substance dans l'échantillon.
* zone sous le pic: Dans GC et HPLC, la zone sous le pic est proportionnelle à la quantité de substance.
Exemple:
Imaginez que vous souhaitez analyser un mélange de sucres (glucose, fructose et saccharose). Ces sucres sont incolores, mais vous pouvez les séparer en utilisant TLC ou HPLC.
* TLC: Après avoir exécuté le mélange, vous pouvez utiliser un réactif comme l'aniline-phtalate (qui réagit avec les sucres pour produire des taches colorées) pour visualiser les composants séparés.
* HPLC: À l'aide d'un détecteur UV / VIS, vous pouvez voir les pics correspondant à chaque sucre lorsqu'ils s'éteignent de la colonne. En comparant les zones de pointe aux normes connues, vous pouvez déterminer les quantités relatives de chaque sucre dans le mélange.
N'oubliez pas que le choix de la bonne technique de chromatographie et de la méthode de visualisation dépend de la substance spécifique que vous analysez.
