1. Hydrolyse d'ester du cholestérol:
- estérase de cholestérol (CE) Hydrolyse les esters de cholestérol dans le cholestérol libre et les acides gras.
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Ester de cholestérol + H2O → Cholestérol + acide gras
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2. Oxydation du cholestérol:
- cholestérol oxydase (chod) oxyde le cholestérol libre au peroxyde de cholent-4-en-3-one et d'hydrogène (H2O2).
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Cholestérol + o2 → cholest-4-en-3-one + h2o2
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3. Réaction de peroxydase:
- peroxydase (pod) catalyse la réaction entre H2O2 et un substrat chromogène, 4-aminophénazone (4-AP) , en présence d'un phénol, généralement phénol 4-aminoantipyrine (PAP) . Il en résulte la formation d'un colorant de quinoneimine coloré.
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H2O2 + 4-AP + PAP → Dye de quinoneimine + H2O
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Points clés:
* Réactions couplées: Les réactions sont couplées, ce qui signifie que le produit d'une réaction sert de substrat pour le suivant. Cela garantit que la formation du produit coloré est directement proportionnelle à la concentration initiale de cholestérol.
* Mesure spectrophotométrique: L'intensité du produit coloré est mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre à une longueur d'onde spécifique. L'absorbance est directement proportionnelle à la concentration de cholestérol.
* Calibration: La méthode nécessite une courbe d'étalonnage utilisant des normes de cholestérol connues pour relier les lectures d'absorbance aux concentrations de cholestérol.
Avantages de la méthode Chod-Pap:
* Sensibilité élevée et précision
* relativement simple et rapide
* largement disponible et standardisé
Inconvénients de la méthode Chod-Pap:
* peut être affecté par la lipémie (niveaux de triglycérides élevés) et l'hémolyse
* nécessite des réactifs et des équipements spécialisés
Dans l'ensemble, la méthode Chod-PAP est une méthode fiable et précise pour mesurer le taux de cholestérol dans le sang. Il est largement utilisé dans les laboratoires cliniques et est considéré comme l'étalon-or pour la détermination du cholestérol.
