1. lyse cellulaire :

- Rassemblez votre matériel qui comprend un échantillon de cellules (tissus végétaux ou animaux), du sel, du savon à vaisselle liquide et un tampon d'extraction d'ADN (tampon TE ou tampon Tris-EDTA).

- Placez un petit morceau de l'échantillon de tissu dans un mortier et un pilon ou dans un petit récipient avec un couvercle.

- Ajoutez une petite quantité de sel à l'échantillon (environ 1/4 cuillère à café pour 1 gramme de tissu).

- Ajoutez quelques gouttes de savon à vaisselle liquide au mélange et broyez ou écrasez soigneusement le mouchoir.

- Cette étape brise les membranes cellulaires, libérant l'ADN.

2. Précipitation des protéines :

- Transférer le lysat (le mélange de cellules brisées) dans un tube à centrifuger.

- Ajouter un volume de tampon d'extraction d'ADN froid égal au volume du lysat. Mélangez soigneusement.

- Le tampon d'extraction d'ADN contient des détergents qui aident à dissoudre les membranes cellulaires et les protéines, ainsi qu'une solution saline qui aide à précipiter les protéines (y compris les histones associées à l'ADN) hors de la solution.

- Les protéines forment un amas et se séparent de l'ADN.

3. Précipitation de l'ADN :

- Centrifuger le mélange quelques minutes à vitesse élevée (environ 12 000 à 15 000 tr/min).

- Cela amènera les protéines précipitées et les débris cellulaires à former un culot au fond du tube, laissant l'ADN dans le surnageant (le liquide au-dessus du culot).

4. Collecte d'ADN :

- Retirez délicatement le surnageant, qui contient l'ADN, dans un nouveau tube.

- Évitez de transférer du pellet, car il contient principalement des protéines et des débris cellulaires.

- L'ADN est désormais sous une forme relativement pure, exempt de la plupart des composants cellulaires et des protéines.

Extraction d'éthanol :

1. Précipitation de l'ADN :

- Dans le tube contenant la solution d'ADN issue de l'extraction au savon salin, ajouter un volume égal d'éthanol froid 95%-100%.

- Mélanger délicatement en retournant plusieurs fois le tube. Ne pas vortexer, car cela pourrait cisailler l'ADN.

- L'ADN commencera à précipiter hors de la solution sous la forme d'une masse blanche et filandreuse.

2. Lavage de l'ADN :

- Centrifuger le mélange quelques minutes à vitesse élevée (environ 12 000 à 15 000 tr/min).

- L'ADN formera un culot au fond du tube. retirer soigneusement le surnageant (la solution éthanolique) sans perturber le culot.

3. Séchage de l'ADN :

- Rincez délicatement le culot d'ADN avec de l'éthanol froid à 70 % pour éliminer les sels résiduels.

- Centrifuger brièvement pour récupérer l'ADN au fond du tube.

- Retirez délicatement l'éthanol sans perturber le pellet.

- Laisser le culot d'ADN sécher à l'air pendant quelques minutes.

4. Resuspension de l'ADN :

- Ajouter une petite quantité de tampon d'extraction d'ADN (tampon TE ou tampon Tris-EDTA) dans le tube contenant le culot d'ADN.

- Utiliser une micropipette pour remettre doucement l'ADN en suspension en pipetant de haut en bas jusqu'à sa dissolution complète.

- L'ADN est maintenant prêt pour une analyse plus approfondie, telle que la PCR, l'électrophorèse sur gel ou d'autres techniques de biologie moléculaire.

Les deux méthodes visent à perturber la membrane cellulaire, à libérer l’ADN, puis à séparer l’ADN des autres composants cellulaires par précipitation et centrifugation. Ils constituent un moyen simple et rentable d’extraire l’ADN à des fins d’expériences de base et à des fins éducatives.