La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est une technique de laboratoire utilisée pour séparer et identifier les composés. Il s'agit d'un type de chromatographie sur colonne qui s'appuie sur différentes polarités des composés dans une solution pour les séparer. La HPLC diffère de la chromatographie sur colonne standard car elle utilise la pression pour forcer la solution à travers la colonne plus rapidement, et produit donc des résultats plus rapides et parfois plus précis. L'objectif est de séparer les composés dans la colonne et de les faire sortir séparément.
Coelution

En raison de la vitesse de la HPLC et de sa dépendance à différentes polarités de composés, deux composés de structure et de polarités similaires peuvent sortir du appareil de chromatographie en même temps ou presque en même temps. C'est ce qu'on appelle la coelution. La coelution rend difficile la détermination exacte de la partie du mélange éluée à quel point.
Composés adsorbés

La HPLC utilise généralement une colonne de verre remplie de billes en différents matériaux. Les mélanges forcés à travers la colonne ont des produits chimiques qui se lient avec des résistances différentes aux billes. La force de la liaison, qui dépend de la similitude de la polarité, détermine combien de temps le produit chimique se liera à la perle avant d'être libéré. Certains composés se lient si fortement qu'ils ne sont pratiquement jamais libérés des billes de la colonne et ne sont jamais mesurés dans la solution sortant de la colonne.
Coût

Les techniques de séparation en laboratoire typiques impliquent le développement d'un test ou d'une méthode de séparation, puis la mise en œuvre de ce test pour séparer les composés individuels d'une solution. Cependant, cela se traduit généralement par de multiples solutions qui doivent également subir des procédures, conduisant à une augmentation exponentielle de la complexité. Bien que la HPLC puisse souvent simplifier et accélérer ce processus, le coût de développement d'un appareil HPLC peut devenir énorme. Le développement d'un appareil HPLC, bien que beaucoup plus efficace, est beaucoup plus coûteux que le développement d'autres tests pour séparer les composés. Cela ne le rend pas financièrement viable pour de nombreux petits laboratoires privés.
Complexité

La CLHP n'est pas seulement utilisée pour séparer des composés simples, elle est également utilisée pour isoler des protéines spécifiques d'un mélange cellulaire. Dans ce cas, les billes de la colonne sont généralement recouvertes d'un anticorps spécifique à la protéine que vous devez collecter. Les protéines se lient aux anticorps et la solution restante est passée à travers la colonne, puis les protéines sont libérées à l'aide d'une autre solution et collectées. Cela nécessite un technicien hautement qualifié pour surveiller la colonne à tout moment et s'assurer que le processus fonctionne exactement comme prévu.