Un groupe de recherche dirigé par le professeur Wang Fangjun de l'Institut de physique chimique de Dalian (DICP) de l'Académie chinoise des sciences a développé une stratégie de spectrométrie de masse native résolue dans le temps (TR-nMS) couplée à une analyse de photodissociation ultraviolette (UVPD). Cette stratégie peut interroger les altérations subtiles induites par la mutation dans la stabilité des protéines et la dynamique de développement de la structure. L'étude est publiée dans le Journal of the American Chemical Society .

Les chercheurs ont initié le processus de déploiement des protéines en mélangeant la protéine en ligne avec de l'acide formique. Grâce à la spectrométrie de masse native (nMS) et à l'ionisation par électropulvérisation non dénaturante (nESI), ils ont surveillé les espèces et les intensités relatives des intermédiaires de déploiement de protéines initiés par l'acide via les distributions d'état de charge (CSD) uniques, et ils ont caractérisé quantitativement les mutations M42T/H114R. induit des altérations de la stabilité des protéines cibles.

De plus, les chercheurs ont utilisé des méthodes de spectrométrie de masse UVPD et d'ions fragmentés pour comparer quantitativement la structure dynamique et les détails moléculaires des intermédiaires de déploiement de la dihydrofolate réductase de type sauvage (DHFR) et du mutant.

L'analyse UVPD a révélé l'effet de stabilisation spécial du cofacteur nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADPH) sur la structure du DHFR, et que les mutations M42T/H114R pourraient réduire les interactions non covalentes NADPH-DHFR, y compris les résidus I41, Q65, V78, D79, I82. , et R98, favorisant ainsi une diminution de la stabilité.

"Ce travail fournit une nouvelle technique pour étudier la dynamique des structures subtiles et les mécanismes pathologiques induits par les mutations", a déclaré le professeur Wang.