1. Inhibition des DNases :Le sang contient diverses enzymes, notamment des nucléases, qui peuvent dégrader l'ADN si elles ne sont pas correctement inhibées. Le perchlorate de sodium agit comme un inhibiteur des DNases, en particulier celles qui nécessitent du magnésium ou du calcium pour leur activité. Il se lie à ces ions métalliques, les empêchant ainsi de participer aux réactions catalysées par des enzymes et protégeant l'ADN de la dégradation.
2. Précipitation des protéines :Le perchlorate de sodium est couramment utilisé lors de l’étape de précipitation des protéines lors de l’isolement de l’ADN. Il est ajouté à un lysat ou une suspension cellulaire pour induire la précipitation de protéines, dont l'hémoglobine, abondante dans les globules rouges. La concentration élevée en sel créée par le perchlorate de sodium perturbe la solubilité des protéines, les obligeant à s'agréger et à former un culot lors de la centrifugation. Cela permet de séparer le surnageant contenant l’ADN des protéines précipitées.
3. Précipitation des acides nucléiques :Le perchlorate de sodium peut également être utilisé pour précipiter les acides nucléiques, y compris l'ADN génomique, à partir du surnageant obtenu après précipitation des protéines. Il y parvient en réduisant la solubilité des molécules d’ADN. Lorsque de l'éthanol ou de l'isopropanol est ajouté au surnageant avec du perchlorate de sodium, l'ADN devient insoluble et forme un précipité visible. Ce précipité peut être collecté par centrifugation et purifié davantage pour obtenir un ADN génomique pur.
4. Élimination des contaminants :Le perchlorate de sodium aide à éliminer les contaminants tels que les protéines, d'autres macromolécules et les sels de la préparation d'ADN. La concentration élevée en sel obtenue avec le perchlorate de sodium contribue à la précipitation efficace des impuretés, laissant derrière elle un ADN purifié.
5. Optimisation du rendement et de la qualité de l'ADN :L'utilisation de perchlorate de sodium dans l'isolement de l'ADN génomique peut optimiser à la fois le rendement et la qualité de l'ADN extrait. En inhibant efficacement les DNases, il prévient la dégradation de l'ADN, garantissant ainsi l'intégrité et le poids moléculaire élevé de l'ADN isolé. De plus, l’élimination efficace des contaminants améliore la pureté globale de la préparation d’ADN, la rendant adaptée à diverses applications de biologie moléculaire en aval.
Dans l’ensemble, le perchlorate de sodium joue un rôle essentiel dans l’isolement de l’ADN génomique du sang humain en inhibant les DNases, en facilitant la précipitation des protéines et des acides nucléiques, en éliminant les contaminants et en améliorant la qualité et le rendement de l’ADN isolé.
