L'un des moyens classiques de déterminer la concentration de microbes dans un échantillon est de diluer l'échantillon, de faire pousser les microbes sur des plaques et de compter les colonies. Les microbes étalés poussent à partir d'une unité de formation de colonies constituée d'une ou plusieurs cellules dans une colonie visible qui peut être vue et comptée. Les bactéries sont le microbe le plus commun à évaluer en utilisant le nombre de plaques. Les comptages de colonies sont utilisés pour détecter et dénombrer les microbes dans le sol, l'eau et la nourriture. Les protocoles de dénombrement des colonies mettent l'accent sur une approche précise et méthodique.
Diluer les échantillons, le placage et l'incubation
Si vous colorez simplement un échantillon de microbes sur une plaque de gélose, vous verrez tellement de colonies unités que les différentes colonies vont se mélanger, ce qui les rend impossible à compter. Pour résoudre ce problème, mélangez l'échantillon dans un milieu liquide, prenez une petite quantité de ce mélange et diluez-le davantage. Répétez ce processus six à dix fois. Répartir la dilution finale sur une plaque d'agar et l'incuber pendant quatre à sept jours avant de compter les colonies.
Comptage manuel
L'astuce principale dans le comptage des colonies est de compter chaque point de colonie une fois. Une approche consiste à placer la boîte de Pétri sur un fond de grille et à compter les colonies dans chaque cellule de la grille, se déplaçant dans un modèle méthodique à travers toutes les cellules. Marquer les colonies comptées à l'arrière de la boîte de Pétri peut également être une approche utile. Généralement, vous devrez compter au moins trois plaques; n'utilise que des plaques contenant 30 à 300 colonies pour faire des inférences robustes, suggère le Microbiology Network, une firme qui fournit des services de consultation aux laboratoires et aux fabricants. Les plaques avec des colonies trop nombreuses pour être comptées ou avec trop peu de colonies doivent être re-plaquées à partir d'une nouvelle dilution.
Automated Counting
L'erreur humaine ajoute au temps nécessaire pour compter les colonies manuellement . Pour améliorer à la fois la précision et l'efficacité, placez la boîte de Pétri dans un dispositif automatisé de comptage des colonies. Les compteurs de colonies automatisés prennent une image du plat, séparent les colonies de l'arrière-plan, puis utilisent un algorithme pour compter les colonies sur la plaque. Les algorithmes peuvent avoir des difficultés à différencier les colonies lorsque deux colonies ou plus se touchent sur les bords, c'est donc une zone de développement logiciel en cours.
Rendre le comptage plus compliqué
La précision du calcul de la densité microbienne du nombre de colonies a certaines limites. Les unités formant des colonies peuvent être une cellule unique, une chaîne de cellules ou tout un amas de cellules. L'hypothèse est qu'une colonie représente une cellule, de sorte que les concentrations calculées à partir du nombre de colonies peuvent être faibles. Différents microbes ont besoin de conditions de croissance différentes, et les colonies sur la plaque ne représentent que les microbes qui se développent sur ce milieu de croissance dans ces conditions d'incubation. En outre, le comptage des colonies ne permet pas d'enregistrer les cellules mortes, une considération importante lorsque vous avez besoin de la concentration de cellules dans l'échantillon original.
