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    Les inconvénients du Western Blotting

    Western blot est l'une des procédures les plus courantes dans les laboratoires biochimiques. Fondamentalement, il sépare les protéines d'un échantillon par taille, puis teste en utilisant des anticorps pour déterminer si une protéine donnée est présente. Il est utile non seulement dans la recherche, mais aussi dans les laboratoires médicaux ou de diagnostic; les tests de dépistage de la maladie de Lyme et du VIH, par exemple, impliquent un test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), suivi d'un transfert Western si le test ELISA est positif. Malgré sa popularité, cependant, le transfert de Western a plusieurs désavantages.
























    En d'autres termes, bien qu'ils puissent dire aux chercheurs si une protéine particulière est présente, ils ne permettent pas de quantifier la quantité de protéine présente. Certaines sociétés de biotechnologie vendent maintenant des kits qui permettent aux chercheurs ou aux techniciens de laboratoire de quantifier la quantité de protéine présente en utilisant une courbe standard - mais cela ne fonctionne que si des échantillons purs de la même protéine sont disponibles. De plus, le poids moléculaire d'une protéine ne peut être estimé qu'avec le Western Blot, plutôt qu'avec la spectrométrie de masse.

    Anticorps

    Un Western blot ne peut être réalisé que si des anticorps primaires contre la protéine les protéines d'intérêt sont disponibles. Alors que des anticorps pour de nombreuses protéines différentes sont disponibles auprès d'entreprises de biotechnologie, ils ne sont pas bon marché; Si les anticorps primaires ne sont pas disponibles pour une protéine donnée, il ne sera pas possible d'effectuer un Western blot à la recherche de cette protéine particulière. De plus, les chercheurs voudront peut-être déterminer si une protéine a été modifiée d'une façon ou d'une autre - si elle a été phosphorylée (avec un groupe phosphate attaché par exemple) - et avec la technique Western blot, ils ont besoin d'anticorps spécifiques protéine.

    Entraînement

    Il peut être difficile d'effectuer correctement un Western blot et d'obtenir de bons résultats. Le personnel doit donc être bien formé. Dans ce cas comme dans beaucoup d'autres, l'expérience est peut-être le meilleur tuteur; Cependant, même pour un technicien expérimenté, un transfert Western prend du temps. La portion d'électrophorèse sur gel de l'expérience, par exemple, prendra typiquement de une à deux heures à courir. D'autres tâches peuvent être effectuées pendant que le gel fonctionne bien sûr, mais l'expérience prend encore un certain temps avant d'obtenir des résultats.

    Autres limitations

    Les anticorps peuvent parfois présenter une liaison hors cible, ce qui peut faire pour des résultats plus pauvres. De plus, avec le Western blot, vous utilisez un anticorps contre une protéine spécifique, de sorte que vos résultats ne vous diront que si cette protéine était présente. Par contraste, la spectrométrie de masse à haute résolution révèle toutes les protéines présentes dans un échantillon et, contrairement au transfert Western classique, elle est quantitative. Il est important de se rappeler, bien sûr, que la spectrométrie de masse est beaucoup plus coûteuse et plus difficile à utiliser techniquement par rapport au transfert Western.

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