Dans un article publié dans Petit , les chercheurs ont appliqué avec succès une nouvelle méthode qualitative et quantitative pour la détection d'une séquence d'ADN caractéristique du kinétoplaste de Leishmania infantum, un parasite fréquent en vétérinaire qui affecte aussi les humains.
Dépasser la technique PCR classique
La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est la méthode standard d'aujourd'hui pour identifier la présence d'une séquence d'ADN spécifique dans un échantillon. La PCR utilise des enzymes et deux amorces, brins de courtes séquences d'acides nucléiques qui servent de point de départ pour la copie d'ADN. Lorsque la détection est positive, cette technique produit des millions de copies de la séquence problème pour faciliter sa détection. Cette amplification d'ADN implique des changements thermiques précis (thermocyclage) et des équipements sophistiqués et coûteux, qui sont surmontés par une approche alternative appelée amplification isotherme, effectué à température constante.
Les auteurs de l'article présentent une nouvelle conception d'amplification isotherme utilisant des amorces marquées à la fois avec des nanoparticules d'or et des microbilles magnétiques. Le produit amplifié porte les deux marqueurs permettant une purification et une quantification rapides. Les propriétés magnétiques de la première amorce facilitent la purification/préconcentration de l'ADN amplifié par des méthodes de séparation magnétique. D'autre part, les nanoparticules d'or sont facilement quantifiables par de simples méthodes de détection électrocatalytique. Ainsi, l'utilisation d'amorces marquées avec des nanoparticules d'or et des microbilles magnétiques transforme l'amplification isotherme en une méthode de diagnostic qualitatif et quantitatif plus rapide et plus simple.
Nanoparticules pour la détection de Leishmania et autres tests au point de service
Cette approche a été appliquée avec succès pour la détection d'une séquence d'ADN caractéristique du kinétoplaste de Leishmania infantum, un parasite responsable d'une maladie chez les chiens domestiques, canidés sauvages et humains. La méthode électrochimique a montré une bonne reproductibilité et sensibilité. Par ailleurs, l'ADN amplifié de chiens sans Leishmania était parfaitement discriminé, démontrant la spécificité à la fois de la procédure d'amplification et de la détection électrochimique. En réalité, la performance de l'approche proposée est meilleure que celle obtenue avec d'autres tests au point de service pour la détection de Leishmania, offrant également un outil quantitatif pour la détermination des parasites. Cette méthode représente une méthodologie universelle qui pourrait être appliquée pour toute conception d'amplification d'ADN isotherme.
