Comprendre le processus
* Extraction: La xanthophylle est extraite d'un matériau source (par exemple, les feuilles végétales) en utilisant de l'éthanol.
* spectrophotométrie: La concentration de xanthophylle dans la solution d'éthanol est déterminée à l'aide d'un spectrophotomètre. La xanthophylle absorbe la lumière à des longueurs d'onde spécifiques et la quantité de lumière absorbée est proportionnelle à sa concentration.
Méthodes
Voici deux méthodes courantes pour calculer la concentration de xanthophylle:
1. Utilisation d'une courbe standard
* Préparez une solution standard: Obtenez une norme de xanthophylle pure. Dissolvez un poids connu de la norme dans l'éthanol pour créer une solution mère de concentration connue.
* Créez une courbe standard: Diluer la solution mère pour créer une série de solutions avec des concentrations connues (par exemple, 10, 20, 30, 40, 50 µg / ml).
* Mesurez l'absorbance: Utilisez un spectrophotomètre pour mesurer l'absorbance de chaque solution standard à la longueur d'onde d'absorbance maximale pour la xanthophylle (généralement environ 440-450 nm).
* Tracez la courbe standard: Tracez les valeurs d'absorbance sur l'axe y et les concentrations correspondantes sur l'axe x. Cela créera une relation linéaire entre l'absorbance et la concentration.
* mesure l'échantillon inconnu: Exécutez votre échantillon de xanthophylle extrait à travers le spectrophotomètre à la même longueur d'onde. Trouvez la concentration correspondante sur votre courbe standard en fonction de l'absorbance mesurée.
2. Utilisation de la loi sur la bière-Lambert
* BEAR-LAMBERT LOI: Cette loi stipule que l'absorbance (a) est directement proportionnelle à la concentration (c) de l'analyte et la longueur du chemin (l) du faisceau lumineux à travers la solution. L'équation est:a =εcl, où ε est l'absorptivité molaire (une constante spécifique à l'analyte).
* Déterminer l'absorptivité molaire (ε): Cette valeur est généralement fournie dans la littérature ou peut être déterminée expérimentalement à l'aide d'une solution standard.
* Mesurez l'absorbance: Mesurez l'absorbance de votre échantillon de xanthophylle extrait à la longueur d'onde d'absorbance maximale.
* Calculer la concentration: Réorganisez l'équation de la loi de la bière-lame pour résoudre pour la concentration:c =a / (εl).
Considérations:
* Efficacité d'extraction: Assurez-vous que le processus d'extraction est efficace et que toute la xanthophylle a été extraite du matériau source.
* Pureté des solvants: Utilisez de l'éthanol de haute qualité pour éviter les interférences des impuretés.
* Calibration: Calibrez toujours votre spectrophotomètre avant les mesures pour assurer des résultats précis.
* Sélection de longueur d'onde: Choisissez la bonne longueur d'onde pour l'absorbance maximale de la xanthophylle (généralement autour de 440-450 nm).
* Composés interférents: Sachez que d'autres pigments de votre échantillon peuvent absorber à des longueurs d'onde similaires. Si nécessaire, utilisez une méthode pour séparer la xanthophylle de ces composés interférents.
Exemple de calcul:
Supposons que vous ayez un extrait de xanthophylle dans de l'éthanol avec une absorbance de 0,500 à 450 nm. L'absorptivité molaire (ε) de la xanthophylle à 450 nm est de 25 000 m⁻¹cm⁻¹ et la longueur du chemin (L) de votre cuvette est de 1 cm.
Utilisation de la loi sur la bière-Lambert:
c =a / (εl)
C =0,500 / (25 000 m⁻¹cm⁻¹ × 1 cm)
C =2,0 × 10⁻⁵ m (ou 20 µm)
Remarque importante: Ceci est un exemple simplifié. La méthode et les calculs spécifiques dépendront des circonstances spécifiques et de l'équipement que vous utilisez. Consultez toujours la littérature et les protocoles pertinents pour des résultats précis.
