L'agar est une substance ressemblant à de la gelée dérivée des parois cellulaires purifiées des algues rouges. Il est ajouté aux milieux microbiologiques, qui sont des matériaux sur lesquels les micro-organismes sont cultivés dans les laboratoires, afin de fournir plus d'une structure solide à la substance. L'agar n'a aucune valeur nutritive, donc quand les scientifiques l'utilisent pour cultiver des micro-organismes, ils ajoutent divers nutriments pour augmenter la croissance bactérienne dans des boîtes de Pétri ou des tubes à essai. Lorsque les chercheurs stockent des bactéries dans un tube à essai, on parle d'une gélose inclinée parce que le milieu de croissance liquide se solidifie alors que le tube est dans une position inclinée. Un couvercle à bouchon vissé empêche l'agar de sécher.
Préparation du milieu
Le milieu est préparé différemment pour les plantes inclinées que pour les boîtes de Pétri. La stérilisation est faite avec l'agar dans les tubes; les boîtes de Pétri sont pré-stérilisées avant que l'agar stérilisé ne soit versé dans celles-ci. Mesurez la quantité d'eau nécessaire et mettez-la dans un Erlenmeyer. Chauffer sur un poêle jusqu'à ce qu'il soit presque en ébullition. Ajouter d'autres ingrédients si nécessaire et remuer le mélange lentement et constamment jusqu'à ce qu'ils se dissolvent. Ces ingrédients peuvent inclure l'extrait de bœuf, la peptone et les tampons de pH, selon le type de micro-organisme cultivé.
Ajouter l'agar
Avant d'ajouter la poudre d'agar déshydratée, mélanger avec une petite quantité d'eau distillée froide pour éviter le grumelage. Soyez prudent lorsque vous ajoutez de l'agar au liquide chaud, car il peut mousser et déborder le pot. Ajouter de petites quantités d'agar à la fois et mélanger pour répartir uniformément l'agar. Éteignez le feu lorsque le mélange commence à bouillir, avant qu'il ne bout.
Tubes de stérilisation
Placez les tubes à essai non bouchés sur un portoir de tubes à essai. Remplissez les tubes à essai en transférant environ 5 millilitres - environ 0,17 once ou 1 cuillère à café - de l'agar fondu de la marmite à l'aide d'une pipette stérile. Capuchon vaguement chacun des tubes à essai, parce que l'agar ne sera pas stérilisé s'ils sont scellés hermétiquement. Stériliser tous les tubes dans un autoclave pendant environ 25 minutes à 121 degrés Celsius, ou 250 degrés Fahrenheit.
Stockez dans une position inclinée
Quand l'agar est encore chaud, inclinez soigneusement le support en rack les tubes à essai sur une surface solide ou un livre épais, en s'assurant que le milieu à l'intérieur des tubes est à une position inclinée par rapport aux tubes à essai. Laisser le milieu refroidir et se solidifier à cet angle, ce qui augmente la surface de la gélose. Serrer les bouchons des tubes à essai après le refroidissement de la gélose. Les pentes sont prêtes à l'emploi une fois que l'agar s'est solidifié. Ils peuvent être conservés à température ambiante ou au réfrigérateur pour une utilisation ultérieure.
Inoculer le Slant
Inoculer le Slant en transférant des cellules avec une boucle d'inoculation d'un micro-organisme monocolitaire sur une plaque à la surface de l'oblique. Déplacez la boucle sur la surface de l'inclinaison et récapitulez les tubes. Incuber la pente jusqu'à ce qu'il y ait des signes de croissance, puis mettre le tube dans un réfrigérateur.
