Organigramme du dépistage par fluorescence PMA-cétone. Crédit :Groupe du Prof. SUN Zhoutong
Les cétones sont d'une grande importance en tant qu'éléments constitutifs de la chimie organique de synthèse et de la biocatalyse. La plupart des cétones ne peuvent pas être facilement dosées quantitativement en raison du manque de propriétés photométriques visibles. Le développement efficace d'un test à haut débit (HTA) est donc nécessaire pour la détermination des cétones.
Le groupe du professeur Sun Zhoutong de l'Institut de biologie industrielle de Tianjin de l'Académie chinoise des sciences a développé une méthode colorimétrique pour détecter rapidement des cétones structurellement diverses en utilisant la paraméthoxy-2-amino benzamidoxime (PMA) comme sonde chimique.
Le système à base de PMA permet un dépistage par fluorescence assez sensible (jusqu'à la gamme μM), compatible avec les systèmes aqueux et une large gamme de pH. Diverses cétones peuvent être utilisées, en particulier ceux avec des substituants riches en électrons et stériquement petits. Le test facile à utiliser peut être effectué dans un format de plaque à 96 puits à température ambiante avec un équipement de laboratoire normal.
Par ailleurs, le test à haut débit développé (HTA) a été utilisé avec succès dans la découverte d'enzymes basées sur l'exploitation minière avec une activité d'oxydation accrue envers les alcools secondaires et dans l'évolution dirigée d'une alcool déshydrogénase visant à améliorer l'activité catalytique en utilisant des cétones comme substrats ou produits.
Ce travail fournit un outil général pour la détection des cétones dans le développement de biocatalyseurs.
L'étude, intitulé "A High-Throughput Fluorescence Assay for Ketone Detection and its Applications in Enzyme Mining and Protein Engineering, " a été publié dans ACS Oméga .