Le bouillon liquide nutritif est utilisé pour cultiver des bactéries comme Escherichia coli. Les recettes pour ce bouillon varient en fonction de l'espèce bactérienne et de la présence de modifications génétiques, par exemple de la résistance aux antibiotiques. Le bouillon peut être solidifié en ajoutant de l'agar, ce qui permet aux bactéries de former des colonies distinctes, tandis qu'en culture liquide, elles se dispersent simplement dans tout le volume. C'est une technique de base mais essentielle pour des méthodes avancées telles que le clonage de gènes ou les dosages microbiologiques. Cet article suppose que les souches standard d'Escherichia coli de laboratoire doivent être cultivées sur des plaques de gélose Luria (LB) (ou boîtes de Pétri).
Peser 10 grammes de tryptone de qualité bactérienne, 5 grammes d'extrait de levure, 5 grammes de chlorure de sodium, 15 grammes d'agar ou d'agarose et 1 millilitre d'hydroxyde de sodium 1N. Mélanger avec un volume d'eau stérile distillée et autoclavée jusqu'à obtention d'un litre de milieu. Autoclaver les médias dans des bouteilles ou des flacons légèrement bouchés pendant 25 minutes. Laisser refroidir à environ 50 degrés Celsius avant d'ajouter les réactifs qui seront détruits à haute température, tels que des antibiotiques ou d'autres suppléments nutritionnels.
Laisser refroidir les médias autoclavés à 50 degrés Celsius et pas moins de 45 degrés Celsius , car l'agar sera placé dans son récipient avant qu'il puisse être versé. Obtenir des boîtes de Pétri stériles et verser suffisamment pour couvrir toute la surface de la plaque et au moins la moitié de sa profondeur. Évitez de trop remplir les plaques et de préférence ne laissez pas l'agar entrer en contact avec le bord supérieur de la capsule. Laisser les plaques se solidifier dans un environnement stérile (par exemple sous une hotte à flux laminaire) en laissant les couvercles fermés et dans un coin de la hotte.
Sécher les plaques. Bien que les plaques puissent être utilisées dès qu'elles sont fixées, de l'humidité sera présente à la surface de la gélose, ce qui empêchera les colonies bactériennes d'adhérer suffisamment. Par conséquent, il est préférable de sécher les plaques avant d'appliquer des bactéries, par exemple en les laissant s'asseoir à température ambiante pendant quelques jours ou pendant une demi-heure sous une hotte à flux laminaire ou dans un incubateur à 37 degrés Celsius.
Rangez les plaques. Les assiettes séchées doivent être empilées à l'envers (retournées) sur leurs couvercles et retournées dans leur emballage d'origine, fermées à l'aide de ruban adhésif et emballées dans du papier aluminium pour les protéger de la lumière ou dans un contenant approprié. Ecrivez toujours la date de préparation sur les plaques et évitez d'utiliser si les plaques ont plus de 2 mois.
Astuce
Effectuez le plus grand nombre des étapes ci-dessus (de préférence toutes) un environnement stérile (par exemple sous une flamme nue ou une hotte à flux laminaire) pour empêcher les contaminants bactériens présents dans l'air de pénétrer dans le milieu et de s'y développer.
