l'expérience
1. Matériaux:
* enzyme: Vous aurez besoin d'une enzyme facile à travailler. Un choix populaire est catalase , qui se trouve dans de nombreux êtres vivants (comme les pommes de terre ou le foie). Il décompose le peroxyde d'hydrogène (H₂o₂) en eau et en oxygène.
* peroxyde d'hydrogène: Le substrat pour la catalase.
* tampons: Solutions qui résistent aux changements de pH. Vous aurez besoin d'une gamme de tampons pour créer différents niveaux de pH. Les choix courants sont:
* tampon de phosphate: Pour la plage de pH 6-8
* tampon de citrate: Pour la plage de pH 3-6
* Tris Buffer: Pour la gamme de pH 7-9
* tubes à essai: Pour tenir les mélanges réactionnels.
* Cylindres gradués: Pour mesurer avec précision les liquides.
* Thermomètre: Pour garantir que toutes les réactions se produisent à la même température.
* Dispositif de mesure: Cela pourrait être A:
* cylindre gradué pour mesurer le volume de gaz d'oxygène produit.
* spectrophotomètre pour mesurer la diminution de la concentration de peroxyde d'hydrogène au fil du temps (plus avancé).
2. Procédure:
1. Préparez vos tampons: Créez une série de tampons avec différents niveaux de pH (par exemple, pH 4, 5, 6, 7, 8).
2. Configurez vos mélanges de réaction: Dans des tubes à essai séparés, combinez ce qui suit:
* Un volume spécifique de la solution tampon choisie.
* Un volume fixe de la solution enzymatique (catalase).
* Un volume fixe de solution de peroxyde d'hydrogène.
3. Contrôle: Créez une réaction de contrôle avec les mêmes ingrédients mais en utilisant de l'eau distillée au lieu d'un tampon. Cela aidera à déterminer si le tampon lui-même influence la réaction.
4. incuber: Placer tous les tubes à essai dans un bain-marie ou un incubateur pour maintenir une température constante (environ 25 ° C).
5. Observer: Enregistrez la vitesse de la réaction. Cela peut être fait par:
* Mesurer la quantité de gaz d'oxygène produit: Observez la formation de bulles dans le tube à essai et utilisez un cylindre gradué pour mesurer le volume de gaz produit sur une période de temps définie.
* Mesurer la diminution de la concentration de peroxyde d'hydrogène: Utilisez un spectrophotomètre pour mesurer l'absorbance du peroxyde d'hydrogène à des longueurs d'onde spécifiques.
6. répéter: Répétez l'expérience avec les mêmes concentrations d'enzyme et de substrat mais en utilisant différents tampons de pH pour voir comment la vitesse de réaction change.
3. Résultats attendus:
* pH optimal: Vous devriez constater que l'enzyme a un pH optimal auquel il fonctionne le mieux. Il s'agit du pH où le site actif de l'enzyme a la forme correcte pour se lier efficacement au substrat.
* Activité diminuée: Aux niveaux de pH au-dessus ou en dessous de l'optimum, l'activité de l'enzyme diminuera. En effet, le pH peut affecter la forme du site actif, ce qui le rend moins efficace pour se lier au substrat.
Concepts clés:
* Les enzymes sont des protéines: Ils ont une forme tridimensionnelle spécifique qui est critique pour leur fonction.
* Site actif: La partie de l'enzyme qui se lie au substrat.
* pH optimal: Le pH auquel une enzyme fonctionne le mieux.
* dénaturation: Les niveaux de pH extrêmes peuvent faire perdre leur forme enzymes et devenir inactifs.
Analyse des données
* Graphiquez vos résultats, en traçant les valeurs de pH sur l'axe X et en vitesse de réaction (par exemple, le volume de gaz d'oxygène produit ou une diminution de la concentration de peroxyde d'hydrogène) sur l'axe Y.
* Vous devriez voir une courbe en forme de cloche, le pic représentant le pH optimal pour l'enzyme.
Faites-moi savoir si vous avez des questions plus spécifiques ou si vous souhaitez explorer d'autres expériences!
