1. Lyse cellulaire:
* Les cellules sont ouvertes, libérant leur contenu, y compris l'ADN.
* Cela peut être fait en utilisant diverses méthodes, telles que:
* détergents: Perturber les membranes cellulaires et libérer le contenu.
* enzymes: Décomposer les protéines, permettant la libération d'ADN.
* Méthodes mécaniques: Comme la sonication ou les battements de billes, perturbent physiquement les cellules.
2. Élimination des débris cellulaires:
* Après la lyse cellulaire, le lysat contient un mélange de composants cellulaires.
* Pour isoler l'ADN, d'autres composants comme les protéines et les lipides doivent être éliminés. Cela peut être réalisé à travers:
* centrifugation: La filature du lysat à des vitesses élevées sépare les composants en fonction de la densité. L'ADN est généralement dans le surnageant.
* digestion: Des enzymes comme la protéinase K décomposent les protéines.
* Salting-Out: L'ajout de sel au lysat, qui précipite les protéines mais laisse l'ADN en solution.
3. Précipitation de l'ADN:
* L'ADN est ensuite précipité hors de la solution, ce qui le rend visible. Cela se fait généralement en utilisant éthanol ou isopropanol .
* Ces alcools sont moins polaires que l'eau, ce qui fait que l'ADN se regroupe et forment un précipité visible.
* L'ajout de sel peut améliorer davantage les précipitations en neutralisant les charges négatives sur la molécule d'ADN.
4. Visualisation:
* L'ADN précipité est ensuite collecté, généralement en le spoulant autour d'une tige de verre ou en utilisant une pipette.
* L'ADN apparaît comme une masse blanche et filandre Parce qu'il est très enroulé et entrelacé.
Points importants:
* Le processus d'isolement et de visualisation de l'ADN peut être optimisé en fonction du type de cellule et de l'application prévue.
* différentes techniques et réactifs peuvent être utilisés en fonction des exigences expérimentales spécifiques.
* La visualisation peut également être améliorée à l'aide de techniques de coloration, telles que l'utilisation d'un colorant comme le bromure d'éthidium, qui se lie à l'ADN et le fait fluorescer sous la lumière UV.
En comprenant le processus de précipitation et de visualisation de l'ADN, vous pouvez isoler et analyser efficacement l'ADN à partir de diverses sources.
