1. Minimiser l'activité enzymatique:
- De nombreuses enzymes, en particulier les protéases, sont sensibles à la température et leur activité augmente à des températures plus élevées. Le rhume du tampon de lyse et de la suspension cellulaire réduit considérablement l'activité enzymatique, empêchant la dégradation des protéines et des acides nucléiques. Ceci est particulièrement important pour isoler les protéines intactes ou extraire l'ARN de haute qualité.
2. Préserver les composants cellulaires:
- Les membranes cellulaires sont composées de lipides, qui deviennent plus fluides à des températures plus élevées. Cette fluidité augmente le risque de rupture et de fuite des membranes, entraînant une perte de composants cellulaires comme les organites et les macromolécules. Les conditions froides maintiennent l'intégrité de la membrane et empêchent la libération indésirable.
3. Réduction de la dégradation des biomolécules:
- Les nucléases (enzymes qui dégradent les acides nucléiques) sont également sensibles à la température. Les conditions froides aident à minimiser leur activité, protégeant l'ADN et l'ARN contre la dégradation pendant la lyse.
4. Ralentir les processus cellulaires:
- Les processus métaboliques dans les cellules se poursuivent même après la lyse. En gardant le froid du lysat, vous ralentissez ces processus, en minimisant davantage la dégradation des composants cellulaires et en assurant une représentation plus précise de l'état cellulaire.
5. Faciliter l'agrégation des protéines:
- Dans certains cas, les températures froides peuvent en fait faciliter l'agrégation de certaines protéines, qui pourraient être souhaitables pour des applications en aval comme la purification des protéines ou la cristallisation.
Considérations spécifiques:
- La température spécifique utilisée (par exemple, 0 ° C ou 4 ° C) dépendra de l'expérience particulière et de la sensibilité des biomolécules cibles.
- L'utilisation d'inhibiteurs de protéase dans le tampon de lyse peut minimiser davantage la dégradation des protéines, même à des températures plus chaudes.
En résumé, l'utilisation d'une condition glacée pendant la lyse cellulaire est une étape cruciale pour maintenir l'intégrité des composants cellulaires, empêcher la dégradation indésirable des biomolécules et assurer une représentation plus précise de l'état cellulaire.
