Les scientifiques utilisent la cytométrie de flux pour différencier différents types de cellules ou d'organismes microscopiques. C'est un outil utilisé dans de nombreuses applications telles que le diagnostic médical ou la médecine légale. Bien que cette technique expérimentale soit relativement facile à réaliser, l'analyse des données complexes produites par le cytomètre en flux est plus difficile en raison des multiples facteurs expérimentaux et /ou des paramètres du cytomètre. En tant que tel, il est courant de visualiser et d'analyser des données cytométriques en utilisant des programmes professionnels sophistiqués tels que CELLQuest ou FlowJo. La connaissance des techniques de cytométrie de flux, des machines et des logiciels est nécessaire pour comprendre les résultats de ces expériences.
Comprendre les données de cytométrie en flux
Clarifier le but de l'expérience en demandant: «Qu'est-ce qui était? la question ou l'hypothèse à l'étude? " Cela sera nécessaire pour ajuster les résultats bruts au format approprié et les paramètres pour une analyse plus approfondie en utilisant un logiciel de cytométrie statistique. Effectuez les modifications nécessaires pour que les données soient affichées avec les paramètres pertinents (par exemple, cellules positives, portes négatives, intensité de fluorescence, populations de cellules, etc.).
Trouvez les portes. Les cellules peuvent être groupées ou simplement observées groupées ensemble sur un diagramme de densité ou de contour. Les groupes se séparent souvent en fonction de leur identité. Si un groupe se colore très intensément pour un marqueur ou un anticorps particulier, on conclut que les membres de ce groupe ont tous l'identité du type cellulaire spécifique, qui exprime ce marqueur. Il est courant de trouver des cellules qui sont positives pour plus d'un de ces marqueurs, et ces cellules sont généralement un intermédiaire et sont dénommées "double positif".
Regardez les scattergraphs. La façon dont les groupes de cellules se propagent dans un nuage de points est une indication de la taille des cellules. Les cellules avec des diffusions très grandes ou hautes sont généralement de grandes cellules; cependant, ils peuvent être grands simplement parce qu'ils contiennent une proportion élevée de cytoplasme, ou ils peuvent être élevés parce qu'ils ont un très grand noyau. En fonction de la biologie étudiée, cela va bien sûr varier considérablement d'une expérience à l'autre.
Regardez les nombres. Ajustez les tracés pour afficher différents paramètres sur un axe (généralement l'axe X) tout en gardant les comptes sur l'axe Y. Ceci indique la proportion de la population de l'échantillon qui est positive pour ce paramètre particulier, car un pic sera normalement observé dans un échantillon coloré positivement, qui sera absent de l'échantillon de contrôle négatif.
Regardez plusieurs histogrammes de paramètres. En ajustant l'axe X et l'axe Y à chacun représentent un paramètre différent qui a été étudié au cours de l'expérience, il est possible d'avoir une meilleure compréhension des propriétés de l'échantillon. Par exemple, en réglant l'axe X sur la fluorescence rouge et l'axe Y sur la fluorescence verte, on peut calculer des portes de style quadrant pour que l'échantillon montre quatre régions d'un quadrant dans lesquelles des cellules sont présentes et colorées pour le rouge ou le vert. fluorescence, les deux couleurs, ou pas du tout. Cela permet de diviser un échantillon hétérogène en ses composants et de visualiser et de quantifier les entités qui se chevauchent.
