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    Comment calculer Km

    Dans les réactions biologiques, les enzymes fonctionnent comme des catalyseurs, fournissant des voies alternatives de réaction et accélérant le processus global. Une enzyme travaille dans un substrat, et sa capacité à augmenter la vitesse de la réaction dépend de la façon dont elle se lie avec le substrat. La constante de Michaelis, notée K M, est une mesure de l'affinité enzyme /substrat. Une valeur plus petite indique une liaison plus serrée, ce qui signifie que la réaction atteindra sa vitesse maximale à une concentration plus faible. K M a les mêmes unités que la concentration du substrat et est égale à la concentration du substrat lorsque la vitesse de la réaction est à la moitié de sa valeur maximale.

    Le diagramme de Michaelis-Menten

    la vitesse d'une réaction catalysée par une enzyme est fonction de la concentration du substrat. Pour obtenir un tracé pour une réaction particulière, les chercheurs préparent plusieurs échantillons de substrat à différentes concentrations et enregistrent le taux de formation du produit pour chaque échantillon. Un graphique de la vitesse (V) par rapport à la concentration ([S]) produit une courbe qui monte rapidement et se stabilise à la vitesse maximale, qui est le point auquel l'enzyme travaille aussi vite que possible. C'est ce qu'on appelle une courbe de saturation ou un diagramme de Michaelis-Menten.

    L'équation qui définit le diagramme de Michaelis-Menten est:

    V = (V max [S]) ÷ (K M + [S}).

    Au point où K M = [S], cette équation se réduit à V = V max ÷ 2, donc K M est égal à la concentration du substrat lorsque la vitesse est la moitié de sa valeur maximale. Cela rend théoriquement possible de lire K M du graphique.

    Le diagramme de Lineweaver-Burk

    Bien qu'il soit possible de lire K M à partir d'un diagramme de Michaelis-Menten, ce n'est pas facile ou nécessairement précis. Une alternative est de tracer l'inverse de l'équation de Michaelis-Menten, qui est (après que tous les termes ont été réarrangés):

    1 /V = ​​{K M /(V max × [ ,null,null,3],S])} + (1 /V max)

    Cette équation a la forme y = mx + b, où

  • y = 1 /V

  • x = 1 /S

  • m = K M /V max

  • b = 1 /[S]

  • x-intercept = -1 /K M

    C'est l'équation que les biochimistes utilisent normalement pour déterminer K M. Ils préparent différentes concentrations de substrat (parce que c'est une ligne droite, ils n'en ont techniquement besoin que de deux), tracent les résultats et lisent K M directement sur le graphique.

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